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PAGE  PAGE 5 产前血清学检查 郝波 1王丹1 陈璐璐1王珍1 曾月明 1 07级检验三班 摘要 目的 通过产前血清学检查，判断夫妻血型不合是否会引起新生儿溶血病（HDN），为临床诊断提供依据，从而采取相关的产前治疗措施。 方法 夫妻双方血型鉴定，母体不规则抗体的筛选及鉴定、抗体效价的测定等血清学检查，羊水胆红素的测定和B超检查。 结果 胎儿患有ABO系HDN和Rh系HDN。 结论 夫妇血型不合应及时检测孕妇Ig G抗体以及其效价，有助于HDN的诊断。 关键词 夫妇血型不合 产前血清学检查 不规则抗体 新生儿溶血病（HDN） 新生儿溶血病中以ABO血型系统不合最多见。ABO系HDN是指母子ABO血型不合，产妇血清中含有与患儿红细胞不相合的致病性抗体IgG，这种抗体经胎盘进入胎儿循环后，可引起胎儿红细胞破坏，出现溶血，其中99%主要发生在O型血的孕妇，其胎儿为A型或B型。Rh血型系统共有5种抗原，即C、c、D、E和e，其中D抗原性最强， Rh系HDN的发病机制与ABO系HDN相同，大多发生在母亲为Rh阴性时，主要由抗D引起，Rh阳性孕妇有时也可发生，是由Rh血型系统中抗E、抗C、抗e、抗c引起，其中抗E最常见。夫妇双方其他血型系统如Kell系统的不合也可以引起HDN。 1 材料与方法 1.1 背景资料：一孕妇，美国人，夫妇ABO血型不合，妊娠一次，产一次，无输血史，流产史，28W时进行围产期保健检查。 1.2 资料分析 根据背景资料，妊娠一次，产一次，无输血史，流产史，考虑孕妇体内可能含有不规则抗体。夫妇ABO血型不合考虑由ABO血型不合可能引起的新生儿溶血。由于夫妇其他血型系统是否相合未知，因此要同时考虑除ABO血型以外的血型系统是否也会引起HDN。 1.3 标本 试剂 器材 1.3.1 标本 孕妇新鲜静脉血液 丈夫新鲜静脉血液 羊水 1.3.2试剂 生理盐水，单克隆抗A、抗B试剂，A、B、O型试剂红细胞悬红，抗D血清，二巯基乙醇，符合国家标准的1-11号鉴定谱红细胞，标准A、B、O红细胞悬液，符合国家标准的1-3号筛选红细胞，聚凝胺试剂盒，抗人球蛋白试剂 1.3.3器材 试管，滴管，玻璃棒，加样枪，试管架，离心机，分光光度计，标记笔，37℃水浴箱 1.4 实验室检查 1.4.1??妻ABO、Rh血型鉴定 (1)标记试管：取洁净小试管14支，分别标明夫和妇正定型抗A、抗B、抗D ；反定型：Ac、Bc、Oc 。 (2)加样：正定型管中分别加入1滴相应抗体试剂和1滴悬红，反定型管中分别加入2滴血清和1滴相应试剂红细胞 。 (3)以上各管以1000 × g离心15s。 (4)将试管轻轻摇动，观察有无凝集或溶血现象，判断血型。 1.4.2 母亲血清学检查 1.4.2.1不规则抗体的筛选与鉴定 取三支试管标记A、B、C，分别加入经过二巯基乙醇处理过的孕妇血清一滴，然后再加入符合国家标准的1—3号筛选红细胞，37℃水浴箱中孵育3min，轻轻摇动试管，观察有无凝集。如果出现凝集则继续做不规则抗体鉴定的试验。 1.4.2.1.1 聚凝胺法 1)取11支试管，分别标记1—11号，每支试管加入经过二巯基乙醇处理过的孕妇血清一滴 2) 1—10号分别加入符合国家标准的1—10号鉴定谱红细胞，11号管加入孕妇的5%红细胞悬液 3)分别往11支试管加入低离子介质0.7ml，混匀，室温孵育1min 4)每管各加入两滴聚凝胺溶液，混合后静止15s 5)1000× g离心1min，倾去上清液 6）轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集，如无凝集，必须重做 7）加入两滴重悬液，并轻轻混合，肉眼观察结果 1.4.2.1.2 抗人球蛋白法 考虑到有些不规则抗体不能用聚凝胺法鉴定，所以用抗人球蛋白法进一步鉴定。 操作步骤同聚凝胺法，把试剂改为抗人球蛋白试剂。 1.4.2.2抗体效价测定 1）取孕妇血清，加入二巯基乙醇破坏IgM 抗体 2）按照血清稀释度标记一组试管(如1:1,1:2...)，1:1是一个体积的未稀释血清，1:2是一个体积的血清加一个体积的生理盐水 3）除第1管（1:1）外，其他试管都加一份生理盐水 4）在第1、2管中各加一份血清 5)将第2管混匀后，移出一份血清稀释至后1管（1:4），用相同的方法继续稀释，从最后1支试管中取出一份备用 6）标记10支小试管，每一个稀释度的血清分别用1支滴管滴2滴在标记的试管中，各加1滴5%的表达某些抗原的红细胞悬液 7）混匀，置于37℃水浴箱中孵育1h ，然后1000× g离心15s，轻轻摇动试管，肉眼观察凝集情况 8）肉眼观察凝集为±的最高稀释度，出现凝集的最高的稀释度的倒数就是试验的结果，如果最高稀释度的血清仍有凝集1+程度，则未