构建免疫球蛋白与细胞因融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗.doc

PAGE  PAGE 13 本文由探生科技技术人员提供，如果您想了解更多关于抗体的信息，可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家查找相关资料,希望对您有帮助！ 构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗 [摘要] 目的 构建免疫球蛋白重链可变区（IgHV）基因片段与细胞因子GM-CSF或IL-2的融合基因表达载体作为家族特异性抗淋巴瘤核酸疫苗，接种动物了解该疫苗抗淋巴瘤免疫功能。方法 从脐带血免疫球蛋白基因文库810个IgHV3/Bluescript克隆获得一些片段长度差异较大的基因片段，测序后利用生物信息资源分析预测其重链可变区的T细胞表位，同时分析本室以前构建的IgHV1６个片段。选择包含了绝大多数Ｔ细胞表位的IgHV1、IgHV3基因，分别将框架区(FR)为主的IgHV(FR)基因片段及IgHV(FR)与GM-CSF或IL-2基因连接后形成的融合基因克隆到真核表达载体pcDNA3.0中。表达载体通过脂质体转染COS细胞， ELISA法确定GM-CSF或IL-2的表达情况。将一些表达载体作为核酸疫苗免疫小鼠，通过间接免疫荧光法和细胞因子分泌法检测小鼠抗同一家族淋巴瘤和正常淋巴细胞的免疫反应。结果 分别将6个不同的IgHV3基因和６个IgHV1克隆测序，翻译为免疫球蛋白序列，利用Rammense计算机评分系统预测这些IgHV1、IgHV3序列上分别受HLA位点限制的T细胞表位，每个IgHV序列中约存在30个左右T细胞表位，90％以上的T细胞表位位于框架区，积分排位于前10％的T细胞表位都位于框架区。２个代表性基因剪切去除CDR3区后构建以框架区(FR)为主的IgHV１(FR)和IgHV３(FR)pcDNA3表达载体。另外将GM-CSF或IL-2基因连接到２个IgHV基因的3’端。最终获得IgHV１(FR)、IgHV1(FR)GM-CSF、IgHV1(FR)-IL-2、IgHV3(FR)、IgHV3(FR)GM-CSF IgHV3(FR)-IL-2 ６种表达载体。表达载体体外转染COS细胞，检测48小时后培养上清中GM-CSF及IL-2。IgHV1(FR)-GM-CSF/pcDNA3.0及IgHV3(FR)-GM-CSF/ pcDNA3.0中GM-CSF的表达量高于对照组空质粒pcDNA3.0 200倍以上；IgHV1(FR)-IL-2 /pcDNA3.0和IgHV3(FR)-IL-2/pcDNA3.0中IL-2的表达量高于对照组空质粒pcDNA3.0 60倍以上。肌肉注射IgHV1(FR)-IL-2免疫动物组在首次免疫后第2周开始检测到抗属于IgHV1家族的淋巴瘤Namalwa细胞系的抗体，IgHV1(FR)组在首次免疫???第4周开始检测到抗Namalwa细胞抗体，IgHV3(FR)组、IgHV3(FR)-IL-2组和pcDNA3.0组小鼠始终对Namalwa细胞呈阴性反应。肌肉注射IgHV3(FR)-IL-2组在首次免疫后第2周开始检测到抗属于IgHV3家族的传代淋巴细胞系的抗体，IgHV3(FR)组第4周开始检测到抗体，而IgHV1(FR)组、IgHV1(FR)-IL-2组和pcDNA3.0组对IgHV3家族传代淋巴细胞系呈阴性反应；这些阳性血清不与K562和Daudi细胞反应，表明注射IgHV(FR)和IgHV (FR)-IL-2表达载体诱导产生的抗体可以识别属于同一家族的淋巴瘤或者其他淋巴细胞。IgHV1(FR)-IL-2 组和IgHV3(FR)-IL-2组免疫小鼠血清IFN-γ含量显著高于pcDNA3.0组（P0.01）；IgHV1(FR)-IL-2 组和IgHV3(FR)-IL-2组血清中IFN-γ含量显著比IgHV1(FR)组和IgHV3(FR)组高(P0.01)。IgHV1(FR)组和IgHV3(FR)组血清中IFN-γ含量与pcDNA3.0组无统计学差异(P0.05)。结论 应用免疫球蛋白重链不同可变区中的框架区基因可以制备表达载体作为基因家族特异性抗淋巴瘤核酸疫苗，肌肉注射可以诱发小鼠的抗淋巴瘤免疫反应。同时融合了细胞因子的表达载体可以明显增强免疫反应。 关键词 核酸疫苗；家族特异性；免疫球蛋白；框架区（FR）；细胞因子；淋巴瘤 _______________________________________________________________________________ Construct immunoglobulin heavy chain variable region gene and cytokine gene co-expression vector as IgHV family