猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查6000概述.docVIP

华中农业大学本科学生毕业论文 猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查分析 姓 名： 专 业： 指导教师： 分 数： 华中农业大学 二O一六年四月 猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查分析 学生姓名、年级专业、指导教师 摘要：繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)是猪“高热综合症”的主要病原之一，它能引起机体免疫抑制、导致继发感染，造成免疫失败等，对养猪业造成了巨大的经济损失。本研究通过对2013年-2015年间****省部分地区发生疑似高致病性PRRSV的猪场进行流行病学调查，一记录发病猪临床症状和解剖症状，采集肺、脾、淋巴结等临床样本，利用RT-PCR对PRRSV阳性病料中的Nsp2，并经特异性试验、敏感性试验、多重RT PCR检测，以此分析****省近年来PRRSV的流行情况。 关键词：猪；繁殖与呼吸综合征病毒；流行病学 前言 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome PRRS)又称“猪蓝耳病”(Blue ear disease)。PRRS主要引起怀孕母猪流产、早产、死胎和木乃伊胎等繁殖障碍，仔猪和育肥猪出现呼吸道症状，感染猪出现免疫抑制和亚临床感染并对其它致病因子的易感性增加，给养猪业造成巨大的经济损失，被列为我国二类传染病。 猪是PRRSV主要的自然宿主，不同性别、年龄、品种的猪都可被该病毒感染，但以感染的妊娠母猪和初生仔猪表现的临床症状最为明显。PRRSV在猪体内能形成持续性感染，感染时间可达数月甚至更长。感染猪可在80-100天内排毒并感染同一猪群。对持续感染的带毒猪进行病毒分离，发现6-9周龄仔猪分离率最高。PRRSV在猪群中的持续性感染，给PRRS的控帘和净化带来巨大挑战。故本研究通过对2013年-2015年间****省部分地区发生疑似高致病性PRRSV的猪场进行流行病学调查，为更好的控制该病提供科学依据。 1、实验材料 1.1 研究对象 1.1.1无临床症状猪。无临床症状猪血样样品采集时间为2013年至2015年，采集****省***市中区6个乡镇及周边地区的12个兔疫猪场。这些猪场猪群表现正常，未见明显的PRRSI陆床症状。采集完血样常温或放置40C???箱，待2～12h后rpm, 40C离心5 min。取上清置-200C冰箱保存。 1.1.2发病猪病。发病猪病料采集时间为2013年至2015年，采集****省***市畜牧兽医局兽医试验室化验门诊病历，分别来自***市8个乡镇及周边地区的48个不同规模猪场及农村散养户“疑似猪高热病”病猪或血样。“疑似猪高热病”临床症状有:可疑病猪主要有体温升高，多在39.2～42℃之间，呈稽留热，若用抗生素和解热药治疗后，体温恢复正常，停药后马上反弹。精神倦怠，少食或不食。有的表现喘气或呈不规则呼吸，部分患猪流鼻涕、打喷嚏、咳嗽、眼分泌物增多、眼睑肿胀，出现结膜炎症状，部分猪伴有腹泻，有时便秘。初期全身皮肤发红，后转为耳部、胸腹部、背部及四肢皮肤有紫红色斑点。怀孕母猪出现流产、早产、产弱胎、死胎及木乃伊胎等现象。 共调查、收集48个不同规模猪场及农村散养户172份病料，包括病猪心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、胎儿组织、胎盘等脏器或血液样品。每一病例取部分病变组织3.0g左右，加少量灭菌PBS，用灭菌研磨器研磨至糊状，再加灭菌PBS释成乳剂，置-70 0C冰箱反复冻融3次(血清样品无需研磨反复冻融)，3000～4000 rpm, 4℃离心5 min，取上清置-20 0C冰箱保存。 1.2主要试剂及仪器 Taq DNA聚合酶、鼠源反转录酶（M-MLV)，RNA酶抑制剂(Rnase Inhibitor )，dNTP，pMD 18-T载体均购白大连宝生物工程有限公司；Trizol Reagent购白invitrogen公司；DEPC购白Amresco公司；琼脂糖购白Sigma公司。其他化学试剂（如：氯仿、异丙醇、无水乙醇等）均为国产分析纯产品；PRRSV抗体检测试剂盒(购自北京爱德士元亨生物科技有限公司)。 TGL-16G型高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；80-2B型低速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；HH.B 11型电热恒温培养箱(潍坊医疗器械厂)；SW-TC-2A型超净工作台(上海博迅实业有限公司)；ELX800型酶标仪(美国BioTek公司)；TGL-16G型常温离心机(上海安亭科学仪器厂制造