实验三、小鼠骨髓染色体制备与观察.pptVIP

实验三、小鼠骨髓染色体标本的制备及观察;一、实验目的;二、实验原理;18三体综合征;二、实验原理; 骨髓细胞 数量多且分裂旺盛，可直接进行染色体标本的制备。取材方便，操作简单和无需无菌培养，是研究小型哺乳动物等染色体的常用方法。 ; 怎样才能制备一个好的染色体标本？ 获得大量处于有丝分裂中期的细胞。 使细胞膜破裂，且染色体能够完整并较分散的释放出来。;秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期，积累大量中期分裂相细胞。 低渗作用: 使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互缠绕和重叠。 预固定：终止低渗作用，使细胞离心时不易破裂，固定维持细胞形态结构。 高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。;三、实验器材和试剂;1.秋水仙素处理：选择体重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，与处死前4h，对其进行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。;颈椎脱臼法处死小鼠;3. 低渗：用吸管吹打骨髓细胞使其分散，加入预温37℃的低渗液至8ml,将离心管至37℃水浴锅中，保温至少30 min后取出，使细胞充分吸水膨胀。 ;4. 预固定：加1ml新配制固定液 混匀 1500r/min，5min 弃上清液。 固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需现配；离心需要配平。 作用：终止低渗；维持细胞的膨胀状态；防止离心破裂;6. 滴片：冰片倾斜30°, 细胞悬液距离玻片30cm高，在不重叠位置滴1～2滴，用口吹散细胞，过火焰干燥。 注意：载玻片预冷、高度、吹散、不可使载玻片烫手。 7.染色：在玻片上滴几滴Giemsa染液并铺匀，8～10min，倒去染液，晾干。（染色盘中进行） 8.小鼠染色体观察： 低倍镜、高倍镜下寻找染色体分散的中期分裂相.;小鼠骨髓染色体 10 ×10;小鼠骨髓染色体 10 ×40;; 数目观察：小鼠2倍体细胞染色体，数目2n=40条。其中19对为常染色体，一对为性染色体，染色体的核型分为4组。雄性 XY, 雌性XX,Y染色体最小。 形态特征观察：端着丝粒染色体“U”“V”。 ;五、注意事项;六、作 业