轉基因动物制备技术.pptVIP

6.转基因技术 （Transgenic technology）;6.1 转基因与转基因动物;概念;转基因动物 是指那些在其所有体细胞基因组内稳定整合着以实验方法导入的外源DNA的一类动物，这类动物由于外源遗传物质的稳定存在而被赋予某种新的表型。这种表型可通过携带外源遗传物质的生殖细胞而传递给子代动物个体。;转基因的方法;显微注射法建立转基因鼠;技术路线; 1. 显微注射DNA的制备与纯化 2. 鼠的种类、安置与饲养 3. 超排卵与取卵 4. 显微注射 5. 卵的转移 6. 转基因鼠系的建立;显微注射DNA的制备与纯化; 2.鼠的种类、安置与饲养;3.超排卵与取卵;2）取卵：;4. 显微注射; 2）显微注射操作 倒置显微镜可配用培替培养皿作注射槽，滴1大滴M2培养液在培养皿中心，上面覆盖矿物油。;5. 卵的转移;1）输卵管移卵;2）子宫移卵;6.转基因鼠系的建立;用途;用于表达的生物反应器包括动物血液、泌 尿系统、精囊腺、乳腺等，还包括禽蛋和 昆虫（例如家蚕）个体等。 其中动物乳腺生物反应器是目前国际上唯 一证明可以达到商业化生产水平的生物反 应器。据预测，2010年世界上动物乳腺生 物反应器的年产值将达到500亿美元以上。;上海医学遗传所转凝血Ⅸ因子基因羊技术路线：;2.实验动物模型： 研究目的基因在体内表达的调控机 制、在动物个体生长发育中的作 用，以及某些疾病相关基因改变导 致疾病病理表型的分子机制。 ;6.2 基因敲除技术;① 将某基因突变的位点通过同源重组引入小鼠ES细胞。 ② 将含有敲除基因突变位点的ES细胞注入小鼠早期胚胎细胞，孕育出嵌合小鼠。 ③ 嵌合小鼠交配后确定其生殖细胞内是否整合有突变的基因位点。 ④ 在各只敲除突变基因位点杂合性小鼠之间交配产生纯合性基因敲除小鼠。;Mansur的正负选择系统：;用电转移（Electroporation）法将重组体导入胚胎干细胞，继续作体外培养，并以G418和GANC作双重筛选。因随机插入的DNA通常从头至尾整合入受体细胞DNA中，HSV-tk+基因产物可使GANC转变成一种有毒物质使细胞死亡。如果发生同源重组，由于tk基因在同源区之外不能整合，neor基因在同源区之内得以保留，这样受体细胞抗G418有正选择作用，对GANC无转变功能而没有负选择作用，因此认为存活的细胞是与导入基因发生同源重组。;1、研究基因调控和基因功能； 2、建立人类疾病的转基因动物模型，为医学研究提供材料； 3、改造动物基因型，鉴定新基因和/或其新功能，研究发育生物学； 4、治疗遗传病，即基因治疗。 5、改造生物、培育新的生物品种。;存在的问题： 如被敲除的是具有致命功能的基因，则小鼠将在胚胎早期死亡，如发生致命的出血。 在长大的基因敲除小鼠体内内，各基因功能往往组成网络，互相交织，某些基因具有多种功能。 被敲除基因的功能可以被其他基因的功能代偿，使其表型的改变模糊而难以分析。