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5 第五讲1 PCR技术
聚合酶链式反应 （Polymerase Chain Reaction）;;;PCR技术产生的历史背景;PCR反应的基本过程;PCR反应的基本过程;PCR反应的基本过程;PCR反应的基本要素 ;Template DNA;DNA Polymerase ; pfu DNA Polymerase
来源：是从Pyrococcus furiosis 中精制而成的高保真耐高温DNA聚合酶。
特点：
①它不具有5’→3’外切酶活性，但具有3’→5’外切酶活性，因而可纠正PCR 过程中产生的错误，使产物的碱基错配率极低；
②PCR产物为平端，无3’端突出的单A核苷酸，不能进行T-A克隆。; Vent DNA Polymerase
来源：从嗜热高温球菌(Thermococcus Litoralis)中分离出的。
特点：
①不具有5’→3’外切酶活性，但具有3’→5’外切酶活性，可以去除3’错配的碱基，具有校对功能；
②PCR产物为平端，无3’端突出的单A核苷酸，不能进行T-A克隆；
③PCR产物的扩增长度可达10kb以上。
;Primers（引物）;primers ; InsuF
5-AATCAGCACCTATGTGGTTCTCAYYTNGTNGA-3’
InsuR
5-GCTGGTACAGAGAGCAGATGGAAKYRCARCAYTG-3
其中 Y= C/T
N= A/T/C/G
K= G/T
R= A/G
;PCR引物设计的基本原则;PCR引物设计的基本原则;7 引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处；
8 引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。; 361 AAGGTATCACTAGAATGGCTATTAGCATTGGGTCCAAGCTTAGGAATTGCTCGAGTACCG
421 GGTATTGGTTTAGTTTTTACCGATCTCACCTCTGGAATCCCTGCCAACTTCTCTCGTTTT
481 GTCACTAACCTTCCTGCCTTCCATCGTGTCCTTGTCTTCGTGTGTGTAAAATCAGTACCT
541 GTTCCATTTGTGCCCCCAGCTGAGCGCTATCTTGTGGGCCGTGTGGGTCCGGCTGCTCAT
601 CGGTCTTATAGGTGCATTGTTCGTTATGGGTACCGAGATGTGCATCAGGATGTTGATTCT
661 TTTGAAATCGAGCTAGTTTCCAAACTGGCTGATTTCATTCACTATGATTGGCATCGAAGC
721 CAGCACAGTCCCCATTCTGAGGAGGATGTTTCCCACTCTAACGAATCAACAAGTGAATGT
;dNTPs ;Mg2+浓度 ; PCR反应体系的基本成分 ; 常规PCR反应体系; PCR反应的平台期效应
在反应初期，靶序列DNA片段的增加呈指数形式，随着PCR产物的逐渐积累，被扩增的DNA片段不再呈指数增加，而进入线性增长期或静止期，即出现“停滞效应” ，这种效应称平台期效应。
;PCR反应的平台期效应;PCR反应的平台期效应;PCR反应程序优化的基本原则; ①变性温度与时间
变性温度低，解链不
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