分子生物学讨论课选编.pptxVIP

;蛋白质双向电泳的原理、方法及应用;;Western Blot的原理;2.基本原理;直接法;Western Blot的操作流程;蛋白质 样品制备;?依次在电泳转移槽正极板上铺两 层正极缓冲液Ⅰ湿滤纸，一层正极缓冲液Ⅱ湿滤纸，膜，凝胶，三层负极缓冲液湿滤纸。 ?在膜上做好标记以便定位，并驱逐每层间的气泡。 ?盖上负极板，接通电源，进行转移。 ;封闭;底 物 显 色;Western Blot的操作流程;Western Blot的应用;1.Western Blot法诊断囊虫病;免疫学实验对本病诊断有重要作用，但目前用各种方法纯化的抗原其敏感性、特异性均不理想。 运用DNA重组技术，构建来源于猪囊尾蚴的cDNA表达文库，以囊虫病患者及病猪血清为抗体，从中筛选出4个特异性抗原（cC1、cC2、cP1、cH1）。这些抗原克隆经IPTG诱导，形成β-半乳糖苷酶-猪囊尾蚴特异性抗原的融合蛋白。 采用简化Western blot法，以等比混合的四种融合蛋白为抗原测囊虫病、华支睾吸虫病、包虫病患者血清中的相应抗体;Western印迹分析检测STAT3表达 荧光定量PCR检测STAT3mRNA的表达;3.Western Blot法测定风疹病毒特异性抗原;可采用Western Blot的方法，测定风疹病毒的主要抗原性蛋白，以指导临床应用。;;;;等电聚焦电泳;双向电泳（2DE）示意图;硝酸银染色图谱;