NaCl溶液体系溶菌酶结晶相图的测定_韩毅.pdfVIP

生物物理学报 第十四卷 第三期 一九九八年九月 ACTA BIOPHYSICA SINICA Vol .14 No .3 Sep .1998 NaCl 溶液体系溶菌酶结晶相图的测定 韩 毅 仓怀兴 毕汝昌 (中国科学院生物物理研究所 北京 100101) 摘 要 溶液相图测定是研究蛋白质晶体生长的一重要方法 。使用微量配液(Microbatch)自动化结晶 技术 ,对鸡蛋清溶菌酶 -NaCl 溶液体系的相图进行了较精细的测定 ,获得该体系的精细相图 。该结 果反映了蛋白质结晶相图的一般分布规律 , 并揭示了一些细节特点 。实验还表明 , 微量配液法自动 化结晶技术便于这类相图测定 , 而后者又可提供优化蛋白质结晶条件的有用信息 。 关键词 : 溶菌酶 结晶 相图 过饱和度 微量配液法 蛋白质的溶解性是晶体生长的一个基本问题 , 而结晶相图测定是研究晶体生长重要手 段 。 研究相图有助于了解蛋白质晶体生长的物理化学规律 , 可以使我们较精确的考察蛋白质 溶解度和溶液过饱和度以及溶质浓度等各种因素对晶体生长的影响 , 以确定晶体生长的最佳 范围[ 1] 。 鸡蛋清溶菌酶容易生长出单晶体 。 1946 年 Alderton 报导生长出四方晶系的晶体后 , 溶菌 酶作为模型蛋白被广泛用于蛋白质结晶机理和方法研究 , 其中以 NaCl 为沉淀剂和以 HAc - NaAc 为缓冲体系的系统最为常用 。 Pusey 用接种法测量了溶菌酶溶解度随温度的变化 [ 2] , Ro senbe rg er 使用配液法测量了溶菌酶溶解度和 pH 值的关系[ 3] , 在此基础上 , How ard 测定了 不同 NaCl 浓度下溶菌酶的溶解度 。80 年代初 , 人们已经得到溶菌酶溶解度随温度 、pH 值变化 的三维曲面图 。尽管对溶菌酶结晶的研究开展得较为深入[ 4] , 但对结晶机理研究较有用 、能提 供较多信息的过饱和溶液中晶体生长行为的研究仍停留在溶解度曲线测定水平上 。 在以往的蛋白质结晶相图测定实验中主要采用接籽晶法和配液法两种方法 , 虽然各有优 缺点 , 但都难以用来测定一定温度和 pH 值条件下溶菌酶的完整结晶相图 。 1 材料和方法 采用的化学试剂和有关材料包括 :0 .1M NaAc -HAc 缓冲液(pH =4 .5), (北京化工厂 分析纯产品), 缓冲液配制的鸡蛋清溶菌酶 (Sigma Co .N o .6876)溶液 , 浓度为 100mg /m l , 沉淀剂溶液为溶解于缓冲液的 20 % NaCl(北京化工厂分析纯产品), 石蜡油(Paraffin liquid , Colorless light BDH Co .N o .29436)。 实验使用英国 Doug las Instrum ent 公司制造的 IM PAX 蛋白质晶体生长条件搜索装置 , 应用微量配液法进行相图测定 。该仪器采用一组高精度步进电机 , 推动微量加样器分别加注 [ 5 -8] 蛋白质溶液 、沉淀剂 、