猪源支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素基因的猪源支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素基因的.pdfVIP

Research Paper 研究报告 微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 48(3): 330~336; 4 March 2008 ISSN 0001-6209; CN11-1995/Q 猪源支气管败血波氏杆菌百日咳杆菌黏附素基因的 原核表达及其抗体检测 ELISA 方法 赵战勤, 薛云, 吴斌*, 汤细彪, 陈焕春, 李增强, 胡睿铭, 张建民, 段龙川 (华中农业大学动物医学院, 农业微生物学国家重点实验室, 武汉 430070) 摘要: 【目的】以猪源支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica, Bb)百日咳杆菌黏附素(PRN) 基因的原核表达产物为抗原建立检测 PRN 抗体的间接 ELISA 方法。【方法和结果】利用谷胱甘肽-S- 转移酶(GST)表达系统对 PRN 基因在大肠杆菌中进行融合表达。SDS和 Western blot 检测证 实该基因获得高效表达, 产物易于纯化且具有良好的免疫学活性。通过凝血酶酶切 GST-PRN 并回收, 获得不含 GST 载体蛋白的 PRN 蛋白片段。以 PRN 蛋白片段为抗原建立检测天然 PRN 抗体的间接 ELISA 方法。该方法对猪巴氏杆菌病等 7 种常见细菌性疾病阳性血清的检测结果均为阴性, 其敏感 性比乳胶凝集试验提高 4～128 倍, 能检测到人工感染 14 d 后的仔猪血清抗体 IgG, 对临床送检的 1,229 份猪血清的检测阳性率为 32.7%。ELISA 方法对阳性猪场的监测结果预示了保育期仔猪的合群 导致猪群大量感染支气管败血波氏杆菌。【结论】该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点, 可用于猪群 PRN 抗体水平监测和猪波氏菌病流行病学调查。 关键词: 支气管败血波氏杆菌; 百日咳杆菌黏附素; ELISA 中图分类号: R392 文献标识码: A 文章编号: 0001-6209 (2008) 03-0330-07 支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica, 目前, 针对猪波氏菌病诊断方法的报道很少, 主要 Bb)可引起猪发生肺炎和非进行性萎缩性鼻炎, 也是 是细菌学检查、血清学凝集试验、PCR 检测等方法[1]。 猪呼吸道疾病综合症的重要致病因子之一[1]。更重要 细菌学检查是通过从肺冲洗物、尸检肺组织及鼻分泌 的是, Bb 的先期感染易于导致其它多种细菌性和病毒 物中进行病原菌的分离、鉴定, 该方法的缺点是操作 性病原, 如多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multicida, 技术要求较高、过程繁琐、花费时间长。而血清学凝 Pm)、猪链球菌(Streptococcus suis, S. suis)、副猪嗜血 集试验和 PCR 检测方法常出现假阳性结果。这是因 杆菌(Haemophilus suis, HPS)、猪繁殖与呼吸综合征 为, 血清学凝集试验以灭活 Bb 菌体为检测抗原, 该 病毒(Porcine reproductive and respiratory Syndrome 抗原易于和巴氏杆菌、链球菌等的血清抗体发生交叉 virus, PRRSV)