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生物化学实验;实验内容;一、目的和要求 ; 天然有机物（如蛋白质、核酸及氨其酸等）的含氮量用凯氏定氮法来测定。当天然含氮有机物与浓硫酸共热时，分解出氮、二氧化碳及水。氮转变出的氨与硫酸化合生成硫酸铵。分解反应进行得很慢，可加入硫酸铜及硫酸钾或硫酸钠促进之，其中硫酸铜为催化剂，硫酸钾或硫酸钠可提高消化液的沸点。氧化剂过氧化氢也能加速反应。; 消化完成后，在凯氏定氮仪中加入强碱（NaOH）碱化消化液，使硫酸铵分解，放出氨。用水蒸汽蒸馏法，将氨蒸入过量无机酸(H3BO3)溶液中，然后用标准酸（盐酸）溶液进行滴定，准确测定氨量，从而折算出含氮量。;三、方法步骤; ; 待消化液变成褐色后，再继续消化，直到消化液由淡黄色变成清晰的淡蓝绿色，消化即完成（固体样品约需3小时）。;（三）、蒸馏 ; 仪器应先经一般洗涤，再经水蒸汽洗涤。一般洗涤是先用水洗净棒状玻塞周围，每次实验后要洗去氢氧化钠溶液，以防样品加入时立即放氨。使用前全部蒸馏装置必须用水蒸汽充分洗涤。用水蒸汽洗涤蒸馏器的目的在于洗去冷凝管中可能残留的氨。对于处于使用状态的仪器（尤其是正在测定中的仪器），加样前使蒸汽通过1～2min即可，对于较长时间未使用的仪器，必须用水蒸汽洗涤到吸收蒸汽的硼酸-指示剂混合液颜色合格为止。
; 加样前先撤火1并务必打开夹子，否则，样品会被倒抽到反应器外。取下棒状玻塞，用吸管吸取5mL消化液，细心地插到反应器小玻杯的棒状玻塞的下方。这步必须切实做到，以免加碱后氨立即挥发逸走，让反应液流入反应室中，塞上棒状玻塞，取1只盛有硼酸-指示剂混合液的锥形瓶，放在冷凝器之下口，冷凝器下口必须在硼酸液面之下。此锥形瓶在加碱液（40%氢氧化钠溶液）前或者也可以加样品之前就放在冷凝管下口，并使下口浸入，目的是保证全部吸收氢氧钠溶液与样品接触时放出的氨。; 用量筒向小玻杯加入10mL 40%氢氨化钠，加完后，轻轻地旋转着向上提起棒状玻塞,使碱液慢慢流入反应室，在碱液尚未守全流入时，将玻塞盖紧，向小玻杯中加入约5mL蒸馏水。再轻提玻塞，使一半蒸馏水流???反应室，另一半留在玻杯中水封。
;全部蒸馏完毕后，用0.01024mol/L标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，直至硼酸-指示剂混合液由绿色变回茶褐色，即为滴定终点。;1.指出下列试剂的作用：
（1）消化含氮样品时使用的消化液、硫酸钾及硫酸铜粉末。
（2）蒸馏滴定中的40%氢氧化钠溶液、2%硼酸溶液及2%硼酸溶液中的指示剂。
2.写出以下各步的化学反应式：
（1）蛋白质消化
（2）氨的蒸馏
（3）氨的滴定;预祝同学们
实验成功！
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