765培养基质量控制作业指导书4.docVIP

培养基质量控制作业指导书 文件编号：WLCDC/ZD765  PAGE \* MERGEFORMAT 8 1、目的： 为加强我中心检验科实验室的工作管理，保证实验室的检测质量，特制定此作业指导书； 2、范围： 适用于实验室微生物培养基使用前的质量验收、使用过程中的质量控制。 3、职责： 3.1 检验人员：按照本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制，确保培养基符合相关标准的要求。 3.2 科室负责人：负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制。 4、生产企业提供的材料 培养基生产厂家随产品应提供下列文件： 培养基、独立成分、添加成分名称；批号；使用前的pH；储藏信息和有效期；性能评价和所用测试菌株；技术数据清单；质控证书/必要的安全、危害数据。 5、验收 实验室收到培养基后，应填写“培养基验收检查记录单”，检查包装及完整性，标识是否清晰等，验收合格后按照“培养基编码系统使用规程”对培养基进行编号。 6、 贮存及使用前质量确认 6.1商品化培养基应严格按供应商提供的贮存条件、有效期进行贮存。 6.2 验收合格的培养基应建立“商品化干粉培养基目录清单”，使用前对容器密闭性进行复查。 6.3开封的脱水培养基，每次使用前应对其质量进行检查，通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断培养基的质量变化。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用。 6.4制备好的成品培养基应建立“ 成品培养基目录清单”，每次使用前应检查：颜色是否发生变化?/是否蒸发/脱水?/是否有微生物生长 ?等。如果发生上述异常情况，则不应再使用。 7、制备好的成品培养基的质量控制 新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，符合要求后使用。 成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的测试，根据测试结果及时填写“实验室制备培养基测试结果记录单”。 7、1物理指标控制 1） 测试20℃～25℃的pH值 2）琼脂层厚度；色泽；透明度和（或）是否存在肉眼可见杂质；凝胶稳定性、粘稠度和湿度。 7、2微生物学指标控??? 可根据要求选用定量方法、半定量方法或定性方法（详见表1-表）对培养基性能进行测试，具体操作方法详见作业指导书“培养基性能测试指南”。 7、3微生物污染的控制 从每批制备好的培养基中选取至少一个（或1%）平板或试管，置于37℃或按特定标准中规定的温度培养18h。 8、生长特性 8、1生长率 将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中，每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低限值。 1）定量方法 生长率PR的计算： PR = NS/NO NS：从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。 N0：从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应≥100cfu ）。 要求：非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.7，该类培养基应易于目标菌生长；选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.1；每平板（或每试管）的接种水平为10CFU～100CFU。 2） 半定量方法 半定量方法采用生态测量技术在平板上划线，平板板连续划线区域得分的总和即为生长指数G，G值不应超过标准规定的允许范围。 3） 定性方法 定性方法采用划线法观察。 ①选择性 将浓度为104CFU/mL～106CFU/mL的非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中，培养基的选择性应达到规定值。 ②定量方法 选择因子SF： SF = DO - DS DO：能在参考培养基上生长至少10个菌落的最高稀释度 DS：能在测试培养基上显示生长的最高稀释度 要求：非目标菌在选择性培养基上的SF至少为2 ；半定量和定量法中，非目标菌应部分或全部被抑制。 ③生理生化特性（选择性和特异性） 规定培养基的基本特性，使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特性（菌落形态、大小等）和非目标菌的被抑制程度进行测试。 8、2性能评价和结果解释 按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定，则该批培养基品质优良；若只有物理指标和微生物指标符合规定，则该批培养基可被接收。 表1 计数用选择性培养基 培养基用途培养条件测试菌株参考培 养基控制方法判定标准特征反应Baird- Parker [S]生长率37℃24-48h金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923TSA定量PR≥0.5黑色/灰色菌落，周围为一混浊带，其外有透明带选择性37℃48h