实验3 柱色谱分离染料和薄层色谱鉴定阿司匹林与咖啡因.docVIP

实验三、柱色谱分离染料和薄层色谱鉴定阿司匹林与咖啡因 自我实践实验：旋光度的测定 一、目的 了解柱色谱和薄层色谱的原理 练习柱色谱和薄层色谱的操作 二、原理 (略，见实验指导。P72-74, P53-60) 三、实验仪器 色谱柱，50ml烧杯（二只），10ml量筒，短颈漏斗，长颈滴管(二支)，铁架台，烧瓶夹，双联球，高效薄层板（每组二块），层析缸，毛细管，镊子，紫外分析仪。 四、药品 石英砂，氧化铝，95%乙醇，无水乙醇，混合染料(甲基橙、亚甲基蓝)，0.2mol/L盐酸，咖啡因，阿斯匹林。1,2-二氯乙烷/乙酸（12:1）展开剂。 五、实验操作步骤 （一）甲基橙和亚甲基蓝两种染料的分离 1.装柱 固定色谱柱加约6克氧化铝 用双联球压实 加少量石英砂覆盖 打开活塞 2.加样 加6滴混合染料 打开活塞 加少量乙醇 淋洗 （重复2-3次） （用长滴管） （短滴管约1管） 3.洗脱 用乙醇洗脱 （速度慢可用双联球压出）直到蓝色物质全部洗出 小烧杯接收。 （约10mL） 待蓝色带完全洗脱后加少量0.2mol/L盐酸 淋洗 （重复2-3次）用0.2mol/L盐酸洗脱 （短滴管约1管） （约25mL） 小烧杯接收，直到红色物质全部洗出，速度慢用双联球压出。 4.注意事项： 柱要装的均匀，石英砂少量即可（约2-3毫米厚度） 缓慢加样，尽量不要碰在柱壁上。 洗脱时，洗脱剂加入速度要慢，每次加入的量不要太多 （二）薄层色谱 1.点样 距薄板一端约0.5cm处，用毛细管在一块薄层板上等距离分别点上乙酰水杨酸标样、咖啡因标样和阿加片提取液（乙酰水杨酸与咖啡因的混合样液）。如图所示 2.展开 在层析缸中加入约5ml展开溶剂（1,2-二氯乙烷/乙酸（12:1））后，将薄板放入层析缸中，展开剂液面不得超过点样线。当溶剂前缘距薄板顶端0.5cm时，取出薄板，作好标记，放在空气中自然晾干。 3.检出 在紫外分析仪上，观察荧光的斑点，并描出斑点的位置，计算各样品的Rf值。 例： 4.注意事项： (1) 用毛细管吸取少量的样品（2-3毫米液高），在薄板上轻轻接触点样。 (2) 取放薄板时，用镊子轻轻夹取。薄板放入层析缸时，不要让展开剂液面超过点样线。 自我实践实验： 旋光度的测定 一、目的 了解旋光仪的基本原理，掌握旋光仪的使用方法。 学习比旋光度的计算方法及观察葡萄糖的变旋光现象。 二、原理 (略，见实验指导。P75-81) 三、实验仪器 WXG—4型旋光仪。 20cm长的测量管。 四、药品 5％葡萄糖溶液。 五、实验操作步骤 零点的测定 接通电源，开启开关，待钠光灯稳定后（约5分钟），即可开始测量。 取2dm长的测定管，装满蒸馏水，使液面凸出管口，将小玻片沿管口边缘平推盖好，不能带入气泡，然后垫上橡皮圈，旋上螺帽，放入旋光仪的管槽中，盖好盖子。校正接目镜的焦距，使视野中清晰。旋转手轮，调整检偏镜刻度盘，使视场中三分视场的明暗程度一致，读取刻度盘上所示的刻度，反复操作三次，取其平均值作为零点。 读数方法 刻度盘分为360等分，并有固定游标分为20等分。读数时先看游标的零点落在刻度盘上的位置，记下整数值，再看他的刻度线与刻度盘上的刻度划线相重合的点，记下数据为小数以后的数据。当偏振镜旋转的方向为顺时针时，被测物为右旋性，读数用“＋”号表示；若为逆时针，则被测物为左旋性，读数用“－”表示。 葡萄糖溶液旋光度的测定 1．装管 到去测定管中的蒸馏水，用少量待测的葡萄糖溶液洗涤2～3次，装满待测液，放入旋光仪中。 2．读数 旋转手轮，使三分视场的明亮度重新一致，读取刻度盘上的读数。重复操作二次，取平均值。再减去或加上零位偏差，即为葡萄糖溶液的实际旋光度。 （四）注意事项： 1．葡萄糖溶液配好后，必须放置数小时，待其达到平衡后才能使用。 2．测定管使用后应立即洗净、晾干，以免过久打不开或发霉。