碱基顺序化学分析法.ppt

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碱基顺序化学分析法

3.5核酸碱基顺序分析中的化学方法;化学降解法测序原理;原理示意图;方法成败的关键;DNA样品的制备 待测DNA样品的末端标记 单末端标记DNA片段的分离纯化 碱基特异化学裂解反应 序列胶高压电泳分解 读取序列;载体的选择 ;Puc质粒系列图谱;;DNA样品的制备;DNA样品的末端标记;单末端标记DNA片段的分离和纯化;双链DNA的解链及两条链的分离回收;从聚丙烯酰胺凝胶中洗脱回收DNA;方法二 电洗脱 ;通过第二次限制酶酶切及凝胶电泳分离回收末端标记的DNA片段;合成的寡核苷酸DNA样品的5 ’末端标记;特异性的碱基化学裂解反应;;;合成的寡聚核苷酸的M&G测序法;序列胶高压电泳及序列的阅读;M&G法与Sanger双脱氧链终止法的比较;双脱氧链终止法——M13单链测序系统;双脱氧链终止法的测序原理;机构图;;原理图;载体系统;M13系统——单链DNA的序列测定;;M13载??系统的双脱氧测定图 ;M13载体系统的双脱氧链终止法序列测定;单链模板DNA 的制备;PEG法制备M13实验程序;双脱氧测序反应

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