No.1 —— 如何把液相做到“打游戏”.pptVIP

谢沐风 上海市食品药品检验所 xiemufeng@; 请大家将手机调至“振动”档！(包括闹钟、叫醒、工作安排、约会等) 谢谢您的配合！;液相色谱在药物分析工作中具有举足轻重地位;一、 水相中溶质的溶解方式;二、 流动相的配制与使用;★ 剩余流动相完全可继续使用，密封后放置阴凉处；待下次试验时与新配制的流动相混合后使用。★ 无需担心发霉、无机盐析出、挥发、比例不准等问题，这些皆为疑神疑鬼的表现。（引申至分析人员切忌陷入过度谨小慎微、患得患失的工作状态，要锻炼自己“不干不净、吃了没病”的魄力和勇气！）★ 实践是检验真理的唯一标准！实践吧~;2. 梯度洗脱 流动相配制最为科学的方式是：A相为高比例水相-低比例有机相、B相为低比例水相-高比例有机相（英国药典几乎均如此）；其次为：A相为高比例水相-低比例有机相、B相为???有机相；最不科学的为：A相为纯水相、B相为纯有机相，如既有质量标准采用了此种方式，建议改为第二种或第一种方式，否则基线漂移严重，难以进行稳定的杂质检测。;2. 梯度洗脱 梯度洗脱结束后，建议经5分钟回到初始状态，再平衡5分钟后开始下一测定。这10分钟的稳定极为关键。切勿短时间内回到初始状态，会对仪器和色谱柱损伤较大。（引申至液相一定要配制自动进样装置，这样1台的工作效能可与3台手动匹配。说服领导！）;三、 色谱柱的安装;三、 色谱柱的安装;四、 试验后色谱柱的清洗;四、 试验后色谱柱的清洗;四、 试验后色谱柱的清洗;四、 试验后色谱柱的清洗;五、 试验顺序;(3) 3~5小时 测定空白溶剂，一定要做到基线不漂移后方可开始检测样品。所谓“不漂移”，通常系指以1.0%自身对照溶液主成分峰高约20%高度来设定的视野范围观察所得，切不可设定过小，使杂质峰显得很突兀、基线抖动得很厉害，弄得人很担心。(4) 5~8小时 配制完所有样品，预试了对照溶液和供试品溶液，设定好自动进样程序，程序最后一针设定为小流速过夜，紫外灯关闭。勿设定为切换至B管路洗脱，此举得不偿失。;(5) 9~24小时 放心回家，让仪器自动进样，除非不稳定样品采取“即配即测”方式。充分利用下班后的16小时，做到从容不迫、镇定自若。(6) 第二天0~0.5小时 检查并计算昨晚试验结果，如发现不良记录，将流速增至1.0ml/min，平衡30分钟后，测定重新配制的该份样品即可（同时回校对照一针）。无需全部重新测定，不要过度谨小慎微。(7) 第二天0.5~2.0小时 如上冲洗色谱柱，交给其后试验同事。;六、 液相软件的使用;七、 其他;;只有溶出度/释放度才是;溶出度核心理念 ★ 多条溶出曲线是 —— 口服固体制剂的 “指纹图谱”！ ★ ; 环境（用pH 值表达） 蠕动强度（虽年龄增长、减弱） ;人体内消化道各器官的变化范围 ;胃酸随年龄变化统计表 （日本学者2001年发表的统计数据）; 从专业角度看：疗效的优劣，即药物在体内吸收的多寡，是与生物利用度密切相关的。 优质药品，可在任何体内环境下（即pH值宽范围内）都有一定的崩解、溶出，即对任何人群均有较高的生物利用度。 劣质药品，可能只在一种体内环境下（如胃酸正常者）才有一定的溶出和吸收，而在其他体内环境下可能崩解、溶出就会很差，生物利用度也就很低。（我国药品的问题恰在这里）;0;100 转;(1) 体外药学一致（主要指多条溶出曲线一致）(2) 体内生物利用度一致（即BE试验成功）(3) 临床疗效一致（获得广大医生和患者的普遍认可）;● 体内外相关性理解(Ⅰ)： 体外一致 → 体内多数一致、BE试验成功率高！ 何谓“体外一致”？ ● 如何提高BE试验成功率？ 不可能试验一个处方、进行一次生物等效性试验！; ;生物利用度; 体外都不一致 → 体内多数不一致、 BE试验成功率很低！ 《日本药品品质再评价工程》就是充分利用了该点。 再评价时，由于无法再进行大量“BE试验”，故只好采用体外溶出曲线比对方法。 给予仿制药厂一定时间、更改处方与工艺，使多条溶出曲线与原研制剂一致！;pH 7; 体内一致、即BE试验成功 → 并不意味着仿制制剂临床疗效就一定与原研制剂相当。 因BE试验是采用年轻男性、是人体的最佳状态、这也是BE试验的局限性所在！而原研制剂在临床阶段经过大量病例验证。 越来越多的文献报道，通过BE试验的部分仿制药临床疗效与原研药依然有差距。; 只有通过对体外溶出度（释放度）的严格要求，才能尽可能地增加仿制药在年老患者、在体质虚弱患者体内生物利用度高的概率。这一观点弥补了“生物等效性试验的局限与不足”！ 2014年2月，媒体报道：FDA低调开展