奶粉中双氰胺的检测方法HPLC-UV和HPLC-MSMS法.doc

博纳艾杰尔产品应用案例 地址：天津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 电话：022 传真：022 Email： HYPERLINK mailto:service@ service@ 网址： HYPERLINK  客服：400-606-8099 奶粉中双氰胺的检测方法（HPLC-UV和HPLC-MS/MS法） 北京时间1月25日凌晨消息，新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺，缩写DICY或DCD。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。 本文采用 Cleanert? MAS-QuChERS-双氰胺净化管和Venusil? HILIC液相色谱柱，建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。 1 实验部分 1.1 仪器、试剂与材料 高效液相色谱仪，涡旋振荡器，超声波清洗机，氮吹仪。 双氰胺标准品（CAS： 461-58-5；FW=84.08），Cleanert? MAS-QuChERS-双氰胺净化管，Venusil? HILIC液相色谱柱，微孔滤膜，乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水。 图1双氰胺分子式 1.2 实验步骤 提取、净化：称取1g试样于50mL具塞离心管中，加入2mL水溶解后，加乙腈定容至10mL，超声10min，8000r/min离心5min，取2mL上清液加入Cleanert? MAS-QuChERS-双氰胺净化管填料，涡旋0.5min，8000r/min离心5min，取上清液过0.22μm滤膜，待测。 1.3　实验条件 1.3.1高效液相色谱法（HPLC法）： 色谱柱：Venusil? HILIC（5μm，100?，4.6*250mm）； 流动相： 10mmol/L乙酸铵（pH=4.0）：乙腈=10: 90； 波长：220nm；进样量：10μl；柱温：30℃；流速：1mL/min。 1.3.2 LC-MS/MS法： （1）色谱条件： 色谱柱：Venusil? HILIC（ 5μm，100?，2.1*150mm）； 流动相： 0.5mmol/L乙酸铵（pH=4.0）：乙腈=10:90；进样量：10μL；柱温：30℃；流速：0.2 mL/min。 （2）质谱条件： 质谱仪：API 4000+；离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；CAD：8.00；CUR：10.00；GS1：60.00；GS2：50.00；IS：5500.00；TEM：500.00。 表1双氰胺质谱信息 药物名称监测离子对DPEPCECXP双氰胺85.1/68.1711041685.1/43.17110416注：带“____”的监测离子对为定量离子对。 结果与讨论 2.1 高效液相色谱法： 2.1.1线性关系和检出限 准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液； 分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为0.1μg/mL，0.5μg/mL，1.0μg/mL，2.0μg/mL，5.0μg/mL和10.0μg/mL的标准溶液，按照上述色谱条件，依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见表2： 表2 双氰胺线性方程和定量限（HPLC法） 名称保留时间线性方程相关系数最低定量限（S/N=10）双氰胺4.92minY=116.44X+3.26990.99970.1μg/ml2.1.2检测方法稳定性考察 选用10.0μg/mL的标准溶液连续进样6针，计算其保留时间和峰面积的RSD值，结果见表3： 表3 检测方法定性和定量稳定性考察考察（HPLC法） 标号保留时间/ min峰面积14.9301061.724.9331072.234.9301064.444.9291079.754.9301067.364.9341073.6RSD，%0.040.62 图2 双氰胺0.5μg/mL标准溶液谱图（HPLC）图3 定性定量稳定性考察谱图（HPLC法） 2.1.3准确度和精密度 选取市售某品牌奶粉试样，进行添加回收实验，结果见表4 表4 10μg/g添加回收实验结果（HPLC法） 平行1，%平行2，%平行3，%平均值，%RSD，%98.688.489.892.35.99 图4 奶粉空白谱图（HPLC法）