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Chapter 2 The production Purification of Enzyme;;Contents of chapter 2;2.1 酶源;;?-淀粉酶(曲霉)
葡萄糖淀粉酶(曲霉,根霉)
果胶酶/果胶裂合酶(曲霉)
乳糖酶(曲霉,克鲁维酵母)
蔗糖酶/葡聚糖酶(酵母)
微生物凝乳酶(毛霉)
葡聚糖酶(青霉);;;
一般产胞内酶
主要的酶品种
谷氨酸脱羧酶、天冬氨酸酶、青霉素酰化酶等
基因工程操作酶:限制性内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶等;
能产生多种胞外酶
主要酶品种
淀粉酶类:如?-淀粉酶(胞外)
蛋白酶类:如中性蛋白酶(胞外)
磷酸酶类:碱性磷酸酶(细胞间质)、5’-核苷酸酶等;链霉菌(Streptomyces);黑曲霉(Aspergillus niger);广泛应用于酿造和食品行业
主要酶品种
糖化酶、蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、植酸酶、果胶酶、氨基酰化酶、磷酸二酯酶、核酸酶等;
菌落成熟后产红色色素,颜色较深
腐生真菌,能耐受pH 3.5和10%酒精,尤嗜乳酸
主要酶品种
?-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、蛋白酶、糖化酶、麦芽糖酶、酯酶等;
腐生真菌,存在于空气中及腐烂的物质表面
主要菌种和酶的种类
产黄青霉(Penicillium chrysogenum)
葡萄糖氧化酶、纤维素酶、果胶酶、青霉素酰化酶等
橘青霉(Penicillium citrinum)
脂肪酶、葡萄糖氧化酶、5’-磷酸二酯酶、核酸酶等;青霉属(Penicillium);主要酶种类
纤维素酶
亦用于生产17?-羟化酶,用于甾体转化;
主要产酶品种
糖化酶、蔗糖酶、碱性蛋白酶、果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶等
具有11?-羟化酶,用于甾体药物转化;
能糖化淀粉,能分解大豆蛋白,多用来做豆腐乳、豆豉
主要产酶品种
蛋白酶、糖化酶、?-淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、凝乳酶等;
广泛应用于食品工业,细胞呈圆形、卵形、椭圆形,在麦芽汁培养基上菌落白色有光泽
主要产酶品种
醇脱氢酶、丙酮酸脱羧酶、转化酶等;
细胞呈圆形、卵形或长形,出芽成假菌丝,在麦芽汁琼脂培养基上菌落乳白色或奶油色
主要产酶品种
脂肪酶、尿酸酶、转化酶、醇脱氢酶、17? -羟化酶、具烷类代谢的酶系等;美国食品加工酶及菌种数目;How to Screen New Enzymes?; 为获得降解某种物质的产酶菌种,通常在该物质较丰富的地方寻找。;木质素酶
or
纤维素酶 ;嗜热酶
thermophilic enzyme ;b.产酶菌种筛选;以淀粉为碳源,在含KI-I2的淀粉培养基上,菌落周围因分泌出的?-淀粉酶将淀粉水解而导致蓝色消失,生成“水解圈”。;;c. 产酶菌种改良 ;;案例:高产N-乙酰神经氨酸裂合酶的基因工程育种;d.富集培养,菌种分离 ;2.2 酶的生产及提高酶产量的措施;HOW ARE INDUSTRIAL ENZYMES MADE?;Seed
fermenter;案例:枯草杆菌液态发酵产纳豆激酶;What Factors Affect
Enzyme Production?;
Culture medium
pH
Temperature
Dissolved O2
etc.
;2.2.1 酶生物合成的调节;;a.大肠杆菌生产——半乳糖苷酶, ?-半乳糖苷酶,硫代半乳糖苷转乙酰酶
E.Coli grwon in glucose medium, ?
E.Coli grwon in lactose medium, ?;调节基因;调节基因;;酶的诱导和阻遏操纵子模型;调控方式;;2.2.2 酶发酵过程的控制?;2.2.2.1. 酶生物合成的模式;时间;
酶的生物合成与细胞生长同步进行(生长偶联型)
大部分组成酶和部分诱导酶属于此类。
酶对应的 mRNA 很不稳定;例:米曲霉在含有单宁或没食子酸的培养基中生产单宁酶 [tanase EC 3.1.1.20];
酶合成随细胞生长而开始,细胞进入平衡期后,酶能延续合成一段时间。
属此类的酶可以是组成酶,也可以是诱导酶。
酶所对应的 mRNA 稳定性好。
;例:黑曲霉在以半乳糖醛酸或纯果胶为单一碳源的培养基中,诱导产生聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase,EC3.2.1.15);
酶合成在细胞生长一段时间后才开始,细胞进入平衡期后酶的合成随之停止
酶合成受产物的反馈阻遏或分解代谢物阻遏作用
酶所对应的 mRNA 稳定性较差;例:枯草杆菌碱性磷酸酶 [EC 3.1.3.1] 受其水解产物磷酸的反馈阻遏作用;
当细胞生长一段时间或进入平衡期后,才开始合成并大量积累酶。
许多水解酶属于此类。
阻遏物延缓了酶的合成。
此类酶 mRNA 稳定性好。;例:黑曲霉生产羧基蛋白酶 [EC 3.4.23.6];酶的生物合成模式总
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