多糖类药物分子量及其分布测定.docVIP

多糖类药物分子量及其分布测定的意义和方法，各种分子量的介绍，介绍国内外分析方法的建立方法及对比，以低分子肝素为例。有EP BP方法和USP方法 一、原理 凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography, GPC)测定多糖分子量及分子量分布 或高效分子排阻色谱（High performance size exclusion chromatography, HPSEC) 检测器：紫外( ultra-violet， UV, 200～400nm)和 示差（refractive index, RI) 1. UV检测器 具有共轭双键的化合物都具有紫外吸收 共轭双键 ?p p 和n ? p 电子跃迁，从而导致紫外吸收 由光源产生波长连续可调的紫外光或可见光，经过透镜和遮光板变成两束平行光，无样品通过时，参比池和样品池通过的光强度相等，光电管输出相同，无信号 产生；有样品通过时，由于样品对光的吸收，参比池和样品池通过的光强度不相等，有信号产生。根据朗伯—比尔 定律，样品浓度越大，产生的信号越大， 这种检测器灵敏度高，检测下限约为 10-10 g／ml，而且线性范围广，对温度和流速不敏感，适于进行梯度洗脱。 2. 示差折光检测器 示差折光检测器是根据不同物质具有不同折射率来检测的。 凡是具有与流动相折射率不同的组分，均可以使用这种检测器。 示差折光检测器分为反射式和折射式两种。 反射式的原理：光在两种不同物质界面的反射百分率与入射角和两种物质的折射率成正比。如果入射角固定，光线反射百分率仅与这两种物质的折射率成正比。光通过仅有流动相的参比池时，由于流动相组成不变，故其折射率是固定的；光通过样品池时，由于存在待测组分而使折射率改变，从而引起光强度的变化，测量光强度的变化，即可测出该组分浓度的变化。 示差折光检测器的优点是通用性强，操作简便；缺点是灵敏度低，最小检出限约为 10-7g/ml 。 3.平均分子量的表示方法 数均分子量（Number-average molecular weight） 按聚合物中含有的分子数目统计平均的分子量 高分子样品中所有分子的总重量除以其分子(摩尔)总数 式中，Wi，Ni，Mi分别为i-聚体的重量、分子数、分子量 i = 1－∞ 数均分子量是通过依数性方法(冰点降低法、沸点升高法、渗透压法、蒸汽压???) 和端基滴定法测定 重均分子量（ Weight-average molecular weight） 是按照聚合物的重量进行统计平均的分子量 i-聚体的分子量乘以其重量分数的加和 式中符号意义同前 测定方法：光散射法 Z均分子量（Z-average molecular weight ） 按照Z值统计平均的分子量 测定方法：超离心法 三种分子量可用通式表示： 粘均分子量（Viscosity- average molecular weight） 对于一定的聚合物－溶剂体系，其特性粘数[η]和分子量的关系如下： Mark-Houwink方程K, α方程 K, α是与聚合物、溶剂有关的常数 一般， α值在0.5～0.9之间，故 举例：设一聚合物样品，其中分子量为104的分子有10 mol, 分子量为105的分子有5 mol, 求分子量 讨论： Mz Mw Mv Mn，Mv略低于Mw Mn靠近聚合物中低分子量的部分，即低分子量部分对Mn影响较大 Mw靠近聚合物中高分子量的部分，即高分子量部分对Mw影响较大 一般用Mw来表征聚合物比Mn更恰当，因为聚合物的性能如强度、熔体粘度更多地依赖于样品中较大的分子 高分子分子量多分散性的表示方法 单独一种平均分子量不足以表征聚合物的性能，还需要了解分子量多分散性的程度 ? 以分子量分布指数表示 即重均分子量与数均分子量的比值，Mw / Mn Mw / Mn 分子量分布情况 1 均一分布 接近 1 (1.5 ~ 2） 分布较窄 远离 1 (20 ~ 50) 分布较宽 4. 高聚物的分子量分布 高聚物的分子量分布是指试样中各种大小不等的分子量组分在总量中所占的各自的分量，它可以用一条分布曲线或一个分布函数来表示。 例如，当我们知道高聚物试样中分子量为