2组织芯片的技术120222.pptVIP

组织芯片技术; 组织芯片是由生物芯片发展延伸而来的一种特殊的生物芯片技术,是生物芯片重要的组成部分。 ;　 生物芯片(biochip) 是将大量特定核酸片段、多肽分子、细胞等按照一定的设计方案,通过微加工及微电子技术固定在载体(如硅片、玻片、尼龙膜等) 的表面形成生物分子点阵。生物芯片包括基因芯片、蛋白芯片和组织芯片。; 组织芯片(tissue chip) 又称组织微阵列(tissue microarray) 技术, 是由Kononen 等于1998 年首先建立并报道, 一般是将数十至上百个甚至更多小的组织整齐有序地排列在一张载玻片上而制成缩微组织芯片, 即组织切片。 ; 组织芯片技术是以形态学为基础的分子生物学新技术, 可以做常规病理学的HE 染色、各种免疫组织化学染色、组织化学染色、原位杂交、荧光原位杂交、原位PCR和原位RT－PCR 等, 可在同一张切片上高通量获得组织学、基因和蛋白的表达信息,这项技术的应用范围涵括了整个生命科学中各个基础研究、临床研究、应用研究以及药物开发的相关领域, ;①选取所需蜡块,常规切片做HE 染色,显微镜下 确定目标区并做定位标记。;②采用组织芯片仪在受体蜡块上打孔,并精确排成 微孔阵列。 ③在做标记的蜡块上钻取组织柱,按设计方案移到 受体蜡块上。;;;;;;;;;④把设计好的蜡块放入温箱,根据蜡质,调定温箱 温度,在半融状态下取出,室温冷却,放入4 ℃冰 箱中备用。 ⑤借助特定切片辅助系统—粘着包被带卷片系统, 对组织芯片蜡块连续切片。切片厚度2～ 3μm , 一般可切片50～100 张。;全自动组织芯片仪;;;常见的分类方法: ;; 目前国际上常用的TMA的标本量多为60-100个，组织片的直径在2mm左右。一般情况下，在直径2mm的组织片上有约100000个细胞，而直径0.6mm的组织片上仅有约30000个细胞 。;②按组织来源分为; 预后组织芯片 由治疗前后的肿瘤组织组成，用 于寻找与治疗和预后有关的标志物。 ; 应用组织芯片技术研究的肿瘤范围很广, 几乎涉及全身, 包括胃癌、乳腺癌、鼻咽癌、前列腺癌、肺癌、肝癌、肾癌、膀胱癌、大肠癌、卵巢癌等 ;①不同组织来源肿瘤的相关基因表达状况 ;② 同一肿瘤不同发??阶段的相关基因表达状况 ; 利用组织芯片技术和免疫组织化学技术(SP法)检测40例原发性肝细胞肝癌(HCC)及其相应癌旁、远离癌正常组织中Rb蛋白的表达情况,证明HCC的发生、发展与Rb蛋白的缺失可能有关。;③ 组织芯片与基因芯片联合应用, 发现新 的肿瘤相关基因, 揭示未知的生物功能　 　 ;（2）组织芯片在免疫组织化学质量控制中的应用 ; 北京友谊医院病理科制备标准化组织芯片进行免疫组化质控测定 每张测试片中含9 个组织芯,而每个点都代表不同的组织,阴性和不同程度的阳性都包含在内,能充分反映染色质量的优劣。并且选用了含生物素高的肝和肾作为标记点, 同时又可检测使用生物素标记检测系统的实验室在免疫组化染色前是否灭活内源性生物素 。;左：弥漫性大B细胞淋巴瘤CD20染色（染色理想） 右：弥漫性大B细胞淋巴瘤CD20染色（染色太浅）;左：PR染色，由于未封闭内源性生物素而导致肝细胞胞质着色 右：PR染色，由于未封闭内源性生物素而导致肾细胞胞质着色;左：乳腺癌PR染色（染色理想） 右：乳腺癌PR染色（染色不理想）; 利用组织芯片技术制作特殊染色阳性对照的组织芯片,将阳性对照的组织芯片与待检测的组织裱在同一张玻璃切片上,进行特殊染色 ;4 .组织芯片的优点;（2）平行性 ;（3）实验误差小 组织芯片可同时检测一种肿瘤不同阶段的基因表达状况,能在一张切片上同时看到一个肿瘤组织在原位、转移、复发中的基因扩增情况。它使分析成百乃至上千个肿瘤标本中DNA、mRNA、蛋白质的工作在最短的时间内完成。组织芯片中的众多组织都处在相同条件下进行实验,因此较传统的病理切片的实验误差小。;（4）高效性 组织芯片因其体积小,信息含量高 省时、省力、节约经费、节省试剂（1～2 周之内可完成数千个组织标本的数十个基因表达或蛋白分子的定位、定量、定性分析。是传统病理学方法所需费用的1/ 10～1/ 100） 可最大限度地利用有限的标本资源 ,易于开展交流及合作 ;(5) 用途广泛 既可用于基础研究, 也可用于临床研究。可用于分子诊断,预后指标筛选、治疗靶点定位、抗体和药物筛选、基因和蛋白表达分析等等 ;5.局限性;（2）芯片中