藏猪雌激素受体ESR基因PvuⅡ多态性分析2004畜牧兽医学会.doc

藏猪雌激素受体（ESR）基因PvuⅡ多态性分析 赵中权 赵中权（1977-），男（汉），四川南江人，在读硕士研究生，专业方向：分子标记与动物育种。 帅素容（责任作者）（1963-），女（汉），四川青神人，博士，专业：动物遗传育种与繁殖。 帅素容1 李 平2 甘万华3 高 鹏1 四川农业大学动物科技学院 四川雅安 625014；2.甘孜州畜牧科学研究所 四川康定 626000； 3.四川省稻城县畜牧局 四川稻城 627750 ) 摘要:用PCR-RFLP方法检测了88个藏猪个体的雌激素受体（ESR）基因的PvuⅡ多态性。结果表明，A、B两等位基因的频率分别为43.75%和56.25%，B等位基因频率显著地高于A等位基因的频率(P＜0.05)，说明藏猪具有较高的繁殖性能，为藏猪品种资源保存和合理开发利用提供了科学依据。 关键词：藏猪；ESR基因；PCR-RFLP；繁殖性能 1 前言 雌激素受体(Estrogen Receptor, ESR)是一种与特定激素应答DNA元件(Estrogen Response Elements, ERE)相结合的激活转录因子，由Jenson和Jacobson首先在子宫、阴道等靶组织中发现，它广泛存在于各种动物体内，参与雌性脊椎动物性腺组织基因的表达与调控。结合了配体的ESR与雌激素应答元件（ERE）相互作用，可以改变受激素调控基因的转录，进一步影响雌性第二性征、繁殖周期、生殖力、妊娠维持，从而影响胚胎发育和系统分化。进而影响家畜的繁殖性能及其它生产性性能。现已研究证实，猪雌激素受体基因是控制猪产仔数的主效基因。 藏猪是世界上分布海拔最高地区的放牧型猪种，能适应高原的恶劣气候和低劣饲料环境。具有体型小，鬃毛发达，体质结实紧凑，皮薄，肌纤维细，肌间脂肪含量高，肉质好等特点。据《四川家畜家禽品种志》记载，在放牧条件下藏猪的繁殖性能较低，初产母猪产仔数平均4.5±0.1头，第二胎平均5.4±0.2头，三胎以上平均5.6±0.2头[1]。但据作者在四川省稻城县走访调查结果表明，藏猪繁殖性能不亚于四川其它猪品种，经产母猪平均窝产仔数也能达10头以上。本文对藏猪雌激素受体基因进行PvuⅡ酶切多态性分析，旨在从分子水平上研究藏猪繁殖性能，为藏猪种资源的保护和合理开发利用提供科学依据。 2 材料与方法 2.1 材料来源 本研究样品（88个藏猪个体）随机取自四川省稻城县藏猪原种保护区，采集到的组织样品在-20℃冷冻后，用冷藏箱带回实验室，-70℃条件下保存备用。 2.2 实验方法 2.2.1 基因组DNA提取：用酚/氯仿法从猪耳组织细胞中提取基因组DNA。 2.2.2 引物及PCR反应 引用Short TH等（1997）公布的引物[2]，由上海生工生物技术服务有限公司合成。其序列为： ESRF：5-CCTGTTTTTACAGTGACTTTTACAGAG- 3 ESRR：5-CACTTCGAGGGTCAGTCCAATTAG-3 扩增的特异片段长度约为120bp，位于ESR基因的第5外显子。 PCR反应体系： PCR buffer（含MgCl2 25mmol） 4 μl MgCl2 2.5 μl dNTPs(2.5mmol/L) 4 μl Primers (10pmol/μl each) 1.3 μl Template DNA（1.19μg/μl） 4 μl Taq DNA polymerase(5U/μl) 0.5 μl 加水至 25 μl PCR反应条件：940C预变性4分钟，550C退火45秒，720C延伸1分钟，然后进入如下循环：（94℃ 1分钟, 55℃ 45秒，72℃ 1分钟）×35；循环结束后，72℃延伸8分钟；40C保存。 2.2.3 PCR-RFLP分析 依据所选用的限制性内切酶(PvuⅡ)的酶切条件进行酶切，其反应体系为： 限制性酶缓冲液（10×M buffer） 2.0μl 扩增产物 12.5μl 限制性内切酶PvuⅡ (15U/ul ) 1.0μl 加灭菌超纯水至 20μl 37℃水浴4小时后，取出10000转/分离心2分钟。 2.2.4 检测方法 2.2.4.1 PCR产物检测 取PCR扩增产物4μl用3%琼脂糖(含GoldView染料)检测，60-80伏电泳40分钟，凝胶成相系统扫描记录电泳图谱。 2.2.4.2酶切产物的检测