2016届二轮复习小专题(选修部分).docVIP

2016届二轮复习小专题——限制酶的选择 班级_______姓名_________ 例1：基因工程利用某目的基因（图甲）和Pl噬菌体载体（图乙）构建重组DNA．限制性核酸内切酶的酶切位点分 别是BglⅡ、EcoR I和Sau3A I．请分析 若用同一种限制酶切割甲乙，可选用的酶是___________________，但这样的弊端是____________________ 为避免上述问题出现，可用两种酶切割甲乙，所选用的酶是________和________或________和________ 如果需要按下图方向构建重组质粒，应选用的酶是________和________ 总结 1、通常用同种限制酶切割目的基因和质粒 2、为避免目的基因和质粒的自身环化和反向连接，可选用两种限制酶切割 例2：基因工程中,需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒,便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是 —G↓GATCC—,限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。请分析： 确定能切割相关序列的酶种类，填在上图中 确定你的酶切方案：_______________________________________________________ 总结 切割后质粒上要留有标记基因 例3：嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶， 现欲利用大肠杆菌表达BglB酶，下图为质粒限制酶酶切图谱，bglB基因 不含图中限制酶识别序列，需在bglB基因两端需分别引入 和 不同限制酶的识别序列。 总结 切割后不能破坏质粒上的复制原点、启动子等序列， 2、目的基因插入位点应在启动子和终止子之间 2016届二轮复习小专题——限制酶的识别序列 班级_______姓名_________ 写出下列限制酶切割产生的末端： ①ApaI：5’—GGGCC^C—3’ ②BamHI： 5’—G^GATCC— ③某种酶： 5’—TG^CA— ④SmaI：5’—GGG^CCC— ⑤NotI：5’—GC^GGCCGC — ⑥某种酶：5’—^GATC— 分析：（1）以上酶切出的末端能用DNA连接酶连接的是：____________________（用酶序号表示） （2）连接后产生的序列分别是： （3）产生的序列还能用上述酶切开吗？____________ 大多数限制酶的识别序列由_____个核苷酸组成，也有少数由4、5或8个组成 当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA两条链分别切开时，产生______末端 当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生_______末端 总结 2、根据末端写出酶的识别序列： ①—CA ②—CTGCA —GTAT —G ③—G ④AATTC— —CTTAA G— ⑤GT— CA— 2016届二轮复习小专题——标记基因的作用 班级_______姓名_________ 下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含 质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法正确的是（???? ） ?? A．将重组质粒导入细菌B常用的方法是显微注射法或基因枪法 ??? B．将完成导入过程后的细菌涂在含有氨苄青霉素的培养基上，只有导入了重组质粒的细菌能生长 ??? C．将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌 D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养 （1）该题中“导入”操作完成后能得到三种细菌B： ①未导入任何质粒 ②导入不含目的基因的质粒（即质粒A） ③导入重组质粒， 这三种细胞的抗性依次表现为： ①______________ ②________________________________ ③____________ 因此可根据抗性的差异筛选出成功导入重组质粒的细胞（筛选过程参考最后一题） （2）该题中目的基因表达的标志是细菌能合成___________________ 或8个组成 1、当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA两条链分别切开时，产生______末端 当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，