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助教申优之工作总结 这学期我担任了老师的微生物实验课助教，作为该实验课的助教，我的主要任务就是提前为每个班的学生准备好相关的实验试剂、器材以及至少提前一个星期做好每节课，尤其是重要实验课的预实验，除此之外，协助其他实验课助教顺利完成每节实验课，并帮助老师安排、整理整个实验室也是我助教工作的一部分。作为本学期的助教，除了本职工作外，在工作能力以及对微生物实验课的认识方面对我而言都有很大的进步和提升。接下来我将从我主要做的实验工作方面对这一学期担任的研究生助教工作进行总结。 实验课之前的准备工作 每次的实验课所需要准备的试剂、器材等都需要提前至少一个星期准备，尤其是实验试剂。将实验试剂准备完成后，还需要通过预实验的结果判断试剂的效果是否符合实验理想结果，如果试剂效果并不是很好，则需要重新配制并检验。本学期我所准备的试剂主要有以下： 1、《噬菌体的提取》实验所需培养基——牛肉膏蛋白胨固体及液体培养基、加倍肉汤培养基、半固体素琼脂、磷酸缓冲液、无菌水等； 2、《细菌转导的测定》实验所需培养基——活化E.coil K12F gal+菌液肉汤培养基、EMB培养基等； 3、《厌氧微生物的培养》实验所需的培养基——玉米醪培养基； 4、《微生物与氧的关系》——牛肉膏蛋白胨固体 5、《乳酸发酵》实验所需的酸奶、纯牛奶以及白砂糖、一次性纸杯、勺子等的购买和准备； 6、《细菌抗药性进化》实验所需的所有浓度的抗生素溶液的配制——卡那抗生素、利福平抗生素的母液浓度分别为100 mg/ml、20 mg/ml，在预实验之前需要将这两种母液分别稀释至终浓度为8 μg/ml、10 μg/ml；除此之外，需要从甘油管中活化出本实验所需的两种细菌——荧光假单胞菌（野生型）及其突变体，将这两种菌以划线和涂布的方式分别活化于牛肉膏蛋白胨固体培养基上，并于28℃培养箱中静置培养过夜。 预实验具体任务及实验结果 将实验准备工作做充足后，接下来就是准备进行预实验，预实验一般至少提前1或2周进行，如果预实验失败，则分析失败原因后重新配试剂或者重新进行预实验，以免耽误本科生实验课进程。 1、《细菌转导的测定》和《噬菌体的提取》这两个实验是合二为一的实验。该预实验首先需要活化并制备E.coil K12F gal+菌液，利用紫外线照射及增殖培养后，利用氯仿制备噬菌体裂解液，并将该裂解液放置于4℃冰箱备用。之后，就是进行转导实验，转导实验主要用的就是EMB固体平板，将不同的菌（K12S gal-、K12F gal+和裂解液）用接种环划线分别接种至相应的S 、F、λ位置（如图1所示），将接种好的平板静置，使裂解液渗透后再倒置于37℃培养48 h~72 h，然后观察结果。实验结果如下图2所示。 图1 点滴法转导实验示意图 图2 噬菌体转导实验结果 转导成功的为金黄色菌落 图3 噬菌体转导实验成功的结果图 实验结果显示，噬菌斑体转导实验的噬菌斑明显，这表明该预实验的实验结果符合预期，预实验成功。 凡士林 焦性没食子酸和10% NaOH溶液 丙酮丁醇梭菌 2、《厌氧微生物的培养》厌氧菌的培养主要用于《细菌生理生化反应》中的糖发酵实验。厌氧菌的培养重点在于将接菌需要将培养基中的氧出尽，采用的方法是将培养基在沸水中煮30 min，转接菌后，向培养基中加入足量的液体石蜡，形成封闭无氧环境。向1 L干燥器中加入100 g焦性没食子酸粉末和1 L 10% NaOH溶液，二者混匀后发生吸氧反应，使干燥器中形成无氧环境，并用凡士林封住所有口，菌株培养如图4示，微生物与氧的关系实验结果如图5： 图4 厌氧菌培养 图5 好氧菌穿刺实验 实验结果显示，好氧菌会长在培养基的表面，而厌氧菌丙酮丁醇梭菌长在培养基的底部，兼性厌氧菌会分布于穿刺的各个地方。实验结果符合理论知识。 3、《细菌抗药性进化》预实验是提前2周进行的，本实验是与另外一位助教分工合作完成。将配好的抗生素分别稀释至终浓度后，加入至牛液培养基中，倒平板，然后将养好的野生型荧光假单胞菌和突变型菌株分别涂布至空白（未加抗生素）、加8 μg/ml 卡那抗生素、加10 μg/ml 利福平抗生素的平板培养基上，培养过夜后统计单菌落数量。同时进行96孔板实验，该实验的抗生素分别有两种浓度，卡那为8 μg/ml和16 μg/ml，利福平为10 μg/ml、20 μg/ml，以空白牛肉膏蛋白胨液体培养基做空白对照，在96孔板的四周加入无菌水，也是作为对照，实验结果如图6、7所示： 图6 荧光假单胞菌野生型及突变株涂布结果 图7 荧光假单胞菌野生型及突变株抗进化96孔板实验结果 实验结果显示，这两种抗生素的效果利福平相对更为显著，因此