1氨基酸分离纸层析法.pptVIP

生物化学实验;;Biochemistry;生物化学实验;What should we get;生化实验四大 必杀技;What should we do;实验记录;实验报告（A4大小纸，计算成绩！);成绩;实验一 氨基酸的分离鉴定 ——纸层析法;【实验目的】 ; 纸层析法属于分配层析，它是以层析滤纸为载体，以吸附于滤纸纤维羟基上的一层水（极性）为固定相，流动相是有机溶剂，主要是正丁醇（非极性溶剂）。分离氨基酸是根据不同氨基酸的极性，在固定相和流动相中的分配系数不同而进行分离的（依据相似相溶原理）。;【实验原理】; 氨基酸被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移值)来表示的。 在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。;【实验器材与试剂】;【实验步骤】;2. 准备滤纸 取一张层析滤纸，距纸底边2cm处用铅笔划一横线，沿线每隔2.5cm作一记号为点样处，点样处也不要太靠近两侧边（约距1.5cm），会产生边缘效应。  3.点样（顺纸纹方向）  用毛细管依次吸取标准品氨基酸和混合样，吸管与滤纸垂直，轻轻接触纸面，样品扩散直径小于3mm。一滴滴完后用冷风(低温）吹干，再点第二次，共点三次。;4.扩展 将点完样的滤纸两侧面对齐，用针线缝合，纸的两边不能接触。将点样后的滤纸直立于培养皿的扩展剂中，（点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1 cm ）当溶剂展层至滤纸上沿2cm处展层结束，取出滤纸。用铅笔画出展层前沿位置，在通风橱中用热风吹干。;5. 显色 用喉头喷雾器均匀喷上0.1％茚三酮正丁醇溶液，然后用热风吹干即可显出各层析斑点。 ;6. 测量、计算： 分别测量X、Y值，计算各氨基酸的Rf值。 Rf= X÷Y;注意事项;5、缝合时，滤纸的两个纸边不能相互接触并且底边应对齐，点样线一面滤纸朝外。 6、点样时，样品扩散圈不能过大，直径小于3mm。 7、使用移液管时应右手拿管，左手拿吸耳球并用食指堵管口。 8、使用移液管时，应先看清管的最大刻度，每一格代表多少后再量取。;9、 15ml水是用蒸馏水，在水槽边的大玻璃瓶中。 10、 实验结束请清洗实验玻仪，但不要清洗展层缸及其中的培养皿。 11、有机废液倒入右侧实验台上的“废液收集有机溶剂”大试剂瓶中。 12、 实验结束, 回收竹夹子、A4复印纸、电吹风。 13、实验报告要写同组同学号数、名字，层析滤纸贴在其中一位同学的实验报告上。 14、坐椅推入实验台下，空出过道。;【结果分析与讨论】 【思考题】;;下次实验; 氨基酸（amino acid）：含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物。氨基连在α-碳上的为α-氨基酸。组成蛋白质的氨基酸均为α-氨基酸。 ; 必需氨基酸（essential amino acid）： 指人体（或其它脊椎动物）不能合成或合成速度远不适应机体的需要，必需由食物蛋白供给，这些氨基酸称为必需氨基酸。成人必需氨基酸的需要量约为蛋白质需要量的20%～37%。共有8种其作用分别是： 　　赖氨酸：促进大脑发育，是肝及胆的组成成分，能促进脂肪代谢，调节松果腺、乳腺、黄体及卵巢，防止细胞退化； 　　色氨酸：促进胃液及胰液的产生； 　　苯丙氨酸：参与消除肾及膀胱功能的损??； 　　蛋氨酸（甲硫氨酸）：参与组成血红蛋白、组织与血清，有促进脾脏、胰脏及淋巴的功能； 　　苏氨酸：有转变某些氨基酸达到平衡的功能； 　　异亮氨酸：参与胸腺、脾脏及脑下腺的调节以及代谢；脑下腺属总司令部作用于甲状腺、性腺； 　　亮氨酸：作用平衡异亮氨酸； 　　缬氨酸：作用于黄体、乳腺及卵巢