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第五章 中药制剂中各类化学成分分析 第五章 中药制剂中各类化学成分分析 学习方法 结构 性质 分析方法 第一节 生物碱类成分分析 一、概述 1、概念：生物碱是生物界除生物体必需的含氮化合物（如 氨基酸、蛋白质和B族维生素等）之外的所有含氮有机化合 物，因其结构中氮原子上的未共享电子对而大多具有碱性。 2、含生物碱成分的常用中药： 第一节 生物碱类成分分析 二、理化性质 1、溶解性 大多数生物碱难溶于水，易溶于氯仿、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有机溶剂； 与酸结合成盐后水溶性增加，但酸不同，生成的盐水溶性有差异； 季铵型生物碱、有氮氧配位键的生物碱易溶于水 液体生物碱及一些小分子固体生物碱则既溶于水也可溶于有机溶剂； 含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于一些碱液或热苛性碱液。 第一节 生物碱类成分分析 二、理化性质 2、沉淀反应 大多数生物碱在酸性水溶液中可以与某些试剂生成不溶于水的复盐或分子复合物。 生物碱沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子有机酸 第一节 生物碱类成分分析 二、理化性质 3、显色反应 生物碱在一定pH条件下可与一些酸性染料（多为磺酸肽类）生成有色络合物，可被氯仿等有机溶剂定量提出 结构中具有酯键的酯碱如乌头碱等可与异羟肟酸铁试剂反应产生紫红色； 这些特点可用于中药制剂中生物碱成分的分析 第一节 生物碱类成分分析 二、理化性质 4、紫外光谱特性 结构中具有共轭体系的生物碱均有紫外吸收 结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生物碱，其吸收峰位置与测定时溶剂的pH有关。 第一节 生物碱类成分分析 三、定性鉴别 1、一般理化鉴别 沉淀反应是生物碱理化鉴别常用方法，此反应一般在酸性水溶液中进行 制备样品供试液时必须净化处理，防止假阳性结果 第一节 生物碱类成分分析 三、定性鉴别 2、薄层色谱法 ①吸附剂：硅胶、氧化铝； ②展开剂：多以氯仿、苯等低极性溶剂，加入其他溶剂调整展 开剂的极性； ③由于硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在硅胶色谱板上能形成 盐，使Rf值很小或拖尾、形成复斑等。 ④显色剂：常用改良碘化铋钾试剂，有时喷碘化铋钾试剂之后 再喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更加清晰。如有荧光，不用显色 ⑤ 亦可用碘蒸汽、硫酸铈、碘铂酸等其他的试剂显色。 第一节 生物碱类成分分析 三、定性鉴别 3、纸色谱法 可用于生物碱盐或游离碱的鉴别 4、HPLC： 保留时间定性 5、GC： 可用于小分子生物碱的鉴别 第一节 生物碱类成分分析 四、含量测定 （一）总生物碱的含量测定 1、化学分析法 ①主要使用酸碱滴定法。 ②强碱滴定生物碱盐时，在70%~90%的乙醇介质中终点比在水中明显，因此常将生物碱盐溶于90%乙醇，再用标准碱乙醇液滴定。 ③若选择的溶剂及指示终点方法合适，还可用非水滴定法进行 ④要求：总生物碱的纯度较高，用于药味少成分简单制剂的测定 第一节 生物碱类成分分析 四、含量测定 （一）总生物碱的含量测定 2、分光光度法 （1）直接测定法 ①不经过化学反应、利用生物碱物质自身的光吸收直接进行比色测定的方法。 ②一般用于药味较少、干扰小的中药制剂中总生物碱的含量测定。 第一节 生物碱类成分分析 四、含量测定 （一）总生物碱的含量测定 （2）酸性染料比色法（例题P101） 原理： BH++ In- → BH+·In-（水相）→ BH+·In-（有机相） 关键： 酸性染料的选择：甲基橙、溴麝香草酚兰（BTB）和溴甲酚绿等； pH值的选择：与生物碱和酸性染料的性质有关。 有机溶剂的选择：一般用氯仿、二氯甲烷 水分的干扰及消除 第一节 生物碱类成分分析 四、含量测定 （一）总生物碱的含量测定 （3）雷氏盐比色法 原理： BH++ [Cr(NH3)2(SCN)4]-→ BH [Cr(NH3)2(SCN)4] 测定方法： （复盐沉淀） 复盐沉淀→溶于丙酮（或甲醇）→直接比色测定 样品＋定量过量的雷氏盐→过滤→滤液→比色测定λmax=520nm （4）异羟肟酸铁比色法 用于含有酯键结构的生物碱的测定 第一节 生物碱类成分分析 四、含量测定 （二）单体生物碱成分含量测定 1、TLCS ①生物碱不具有紫外吸收或挥发性时可用本法测定； ②选用的吸附剂、展开剂及显色方法与鉴别相似； ③使用改良碘化铋钾等作为显色剂时，必须完全挥干展开剂后（尤其在碱性环境下展开的）才可喷洒，否则背景深、反差小，影响测定。 第一节 生物碱类成分分析 四、含量测定 （二）单体生物碱成分含量测定 2、HPLC(例题P105) ①以反相高效液相色谱应用较多； ②在反相高效液相色谱中，由于硅胶表面残留硅