第二章、菌种培养1.ppt

第二章 菌种培养 第一节 微生物的生长 一. 生长现象和繁殖方式 这里指微生物的群体生长，包括个体生长和个体繁殖，在发酵工业中，应用最多的是细菌、放线菌、酵母菌和霉菌 1. 细菌（bacteria） 单细胞原核生物，主要靠分裂繁殖 ; 细菌分裂图; 2. 放线菌 单细胞丝状，主要靠无性孢子进行繁殖（图） ;3. 酵母菌 单细胞真核生物，出芽繁殖和子囊孢子繁殖 （出芽）; 酵母菌子囊孢子; 4. 霉菌 单细胞或多细胞丝状真菌，发酵工业中应用最多的是青霉、曲霉、毛霉、木霉等（图）; 二. 生长的测定 微生物的生长和产物的生成有着密切的关系，因此测定生长对发酵的控制很重要 1. 测定细胞的数目 1）浊度计比浊法 2）计数器记数法 对于单细胞的微生物或微生物的孢子比较准确，对于菌丝体比较困难 ; 2. 测定细胞重量 1）细胞干重称量法 2）细胞堆积容积测量法 3）细胞组成分析法 ：蛋白质 DNA RNA 4) 营养物消耗分析法：测定培养基中不用于合成代谢产物的营养物，如磷酸盐、硫酸盐等 5）产物重量分析法：测定培养中形成的CO2、ATP和H2等;三. 群体生长规律（典型细菌生长曲线） growth curve（图） ; 1. 延滞期（lag phase） 是微生物生长过程对外界的适应期 个体重量增加，体积增大，活菌数为增加 原生质均匀，嗜碱性强，RNA含量高，酶类的合成和诱导 菌体对外界物理、化学因素的抵抗力弱，“幼龄期”，代谢活跃 发酵生产中，早期保证营养和氧气，使幼龄菌很好生长; 2. 对数生长期（log phase） 细胞的代时（generation time）最短且恒定，群体细胞以几何级数增加，单位时间内细胞数目或细胞重量的增加（生长速率）恒定 细胞分裂产生的所有菌都是活菌，总菌数与活菌数接近相等 细胞的形态、生理特征一致 在发酵工业中要设法延长此期，获得更多的活细胞（？？？）; 3. 稳定期（stationary phage） 菌体的世代时间加长且不稳定，活菌数的增加与死菌数的增加接近平衡（原因？？？） 如果出现溶菌现象，总菌数将下降 溶菌的结果，使培养基变的更加复杂，导致培养物缓慢地二次生长 原生质内出现贮藏物质，如糖原、异染颗粒、脂肪粒等，液泡，芽孢 稳定期内代谢活动在进行，大量的初级和次级代谢产物主要在此期形成（延长？？？）; 4.衰亡期（decline or death phase） 总菌数可以恒定，但活菌数逐渐减少 细胞容易出现多形态，包括畸形，最后菌体自溶死亡 在发酵工业中，由于活菌数大减，产物产生少，甚至破坏多，菌体自溶影响产物提取，及时结束发酵（？） 霉菌和放线菌在发酵液中呈絮状菌丝体，在不断搅拌下均匀分布在发酵液中，生长规律不典型; 第二节 微生物生长的动力学 研究微生物生长速率、营养物消耗速度、产物生成速度及其相互关系 研究影响反应速率的因素 为获得理想的发酵参数、小型实验数据的放大、发酵生产设备的合理化和提高生成率提供理论依据 生长动力学和产物生成动力学两部分组成 比生长速率和比产物生成率是重要参数; 一. 比生长速率（specific growth rate） 1. 分批培养的比生长速率 当微生物处在最高的生长时期，培养基中营养物过量，此时生长速率与营养物浓度无关，而与细胞浓度有关，其关系表现为微生物细胞浓度（以重量表示）的瞬时增长速率dX/dt和培养液中微生物细胞浓度X成正比，或任一瞬间生长速率与细胞浓度成正比; dX/dt=μX （1） X: 每毫升培养液中细胞的数量 t：培养时间（h） μ：比生长速率，即每单位数量的细菌或物质在单位时间内（h）增加的量 对（1）式积分，得 lnNt-lnN0=μ(t1-t0) 换成以10为底的对数 lgNt-lgN0=μ(t1-t0)/2.303; Nt与N0分别代表t和t0时的细胞数量，测定从N0增加到Nt所用的时间和Nt与N0的量，就可以求出该条件下的μ 如N0时每ml培养液中细菌数为104，经过4小时后该培养液中细菌的数目增加到108，求此条件下细菌的比生长速率（ μ ） μ=(lg Nt -lg N0 )/(t1-t0)?2.303 =(8-4)/4 ?2.303/h =2.303h 代表在该条件下，每个细菌以每小时增加2.303个细菌的速度增加 ;μ：细胞浓度的瞬时增大速率和细胞浓度的比例常数 单位重量菌体的瞬时增量 重量：g 时间：hr μ: 菌体的增重数/hr.g, g/g.hr; 二. 生长的营养条件及其选择 （一）营养