人教版2017年高一生物课题3血红蛋白的提取和分离(38页)(教学课件)[公开课].pptVIP

课题3　血红蛋白的提取和分离;扒干紊恍辽沽畅易榷喝哎赊凛甄恒锦套捌他乒调举衬寡明俱迪宵现赚脑哄人教版2017年高一生物课题3血红蛋白的提取和分离(38页)(教学课件)人教版2017年高一生物课题3血红蛋白的提取和分离(38页)(教学课件);一、蛋白质的提取、分离和鉴定的方法 1.凝胶色谱法——血红蛋白的分离方法: (1)概念:根据_____________的大小分离蛋白质的有效方法,也 称做___________。;(2)原理: ①凝胶 ②分离原理: _________________的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程 _____,移动速度较慢,通过凝胶的时间_____;_____________ _____的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动, 路程_____,移动速度较快,通过凝胶的时间_____。;2.缓冲溶液: (1)作用:在一定范围内,缓冲溶液能够抵制_____________对溶 液pH的影响,维持pH基本不变。 (2)配制:通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成,调节缓冲 剂的_________就可以制得___________________的缓冲液。;3.电泳——血红蛋白的分离或鉴定方法: (1)概念:带电粒子在_____的作用下发生_____的过程。 (2)原理: ①许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有_________ _____,在一定的pH下,这些基团会带上_____或_____。 ②在电场的作用下,这些带电分子会向着_________________ _______移动。 ③电泳利用了待分离样品中各种分子_______________以及分 子本身的_____、_____的不同,使带电分子产生不同的_____ _____,从而实现样品中各种分子的分离。;二、蛋白质的提取和分离过程 1.样品处理:血红蛋白由_____肽链组成,包括两条________和 两条________。每条肽链环绕一个___________基团,此基团可 携带_________或_______________。;(1)红细胞的洗涤: ①目的:___________。 ②方法:;(2)血红蛋白的释放：;(3)分离血红蛋白溶液: 离心后试管中的溶液分为4层,从上往下依次为: 第1层:无色透明的_______。 第2层:脂溶性物质的_______——白色薄层固体。 第3层:_________的水溶液——_____透明液体。 第4层:其他杂质的暗红色沉淀物。 将试管中液体用_____过滤,除去_____________,于分液漏斗中 静置片刻后,分出下层的_________液体。;(4)透析——粗分离: ①过程:取1 mL的_________溶液装入_______中,将其放入盛有 300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的___________中(pH为 7.0),透析12 h。 ②原理:透析袋能使_______自由进出,而将_______保留在袋 内。 ③目的:去除_____________________________。;2.纯化——凝胶色谱操作: 制作___________ 　 装填___________:因为干的凝胶和用_____________的凝胶的 体积差别很大,所以装柱前需要根据色谱柱 的内体积计算所需要的凝胶量。在装填色谱 柱时,不得有_____存在。 　 _________________;3.纯度鉴定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳:判断_____的蛋白质 是否达到要求,需要进行蛋白质___________。鉴定方法中使用 最多的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。;【思考辨析】 1.判断正误 (1)凝胶色谱法分离蛋白质只根据分子大小,与其携带的电荷 性质和大小无关。( );(2)不同蛋白质通过凝胶时,相对分子质量较小的蛋白质易通过 凝胶颗粒,先从层析柱洗脱下来。( ) 【分析】相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道, 路程较长,移动速度较慢,通过凝胶的时间较长,后洗脱下来;而 相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在 凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快,通过凝胶的时间较短, 先洗脱下来。;(3)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白质移动速度与蛋白质分子 大小和其携带的电荷都有关系。( ) 【分析】由于在凝胶中加入了SDS,其所带负电荷的量远远大于 蛋白质分子原有的电荷量,因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷 差别,使电泳迁移速率完全取决于分子的大小。;(4)透析过程中,用到的透析袋是一层选择半透膜,具有选择透 过性。( ) 【分析】透析袋是一层半透膜,小分子能通过,大