第04章培养基.ppt

第四章 微生物的生理;五、微生物的培养基;(一)、配置培养基的顺序和原则;3).营养协调;例如，在利用微生物发酵生产谷氨酸的过程中，培养基碳氮比为4/1时，菌体量繁殖，谷氨酸积累少；当培养基碳氮比为3/1时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。;培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型 微生物的生长繁殖或产生代谢产物。;(二) 、培养基的类型及应用;按物理状态不同划分;琼脂特性;用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基;选择培养基： 选择性——？ 待选的细菌能优势生长 利用微生物对某些物质的敏感程度不同，在培养基中加入一些敏感物质，这样就可以利用这些物质来抑制非目的性微生物的生长，从而使得所需的微生物大量繁殖。 ;① 投毒法;②投其所好法;（2）理化因素控制法 理化因素——特殊的温度、氧气、pH、盐度等环境条件 主要用于筛选极端环境微生物。如嗜盐、嗜热、嗜冷、嗜酸、嗜碱等的细菌，同时也被用于选择性培养好氧或厌氧细菌。;鉴别培养基： 利用几种细菌对某一物质的分解能力不同，借助指示剂的显色不同进行菌种鉴别和区分的培养基。 方法？ 鉴—加入指示剂 别—不同菌落制造不同的代谢物，显色不一 水处理中常用的EMB(伊红美蓝)培养基就是典型大肠菌群内不同种属细菌的鉴别培养基：大肠杆菌中的大肠埃希氏菌、柠檬酸盐杆菌、克雷伯氏菌、产气杆菌四个，对乳糖的分解能力不同。 其中大肠埃希氏菌最强，菌落呈紫红色且带金属光泽；枸橼酸盐杆菌次之，菌落呈紫红色或深红色；产气杆菌最低，菌落呈淡红色。 ;EMB培养基;1.认识;异养细菌的培养基中至少有一种有机物，实验室中通常是葡萄糖 如一种大肠杆菌培养基 葡萄糖 0.5g K2HPO4 1g MgSO4 0.2g NaCl 5g NH4H2PO4 0.4g 水 1000mL;2.配制;（二）根据培养基组分;六、营养物质进入细胞的方式;;1．单纯扩散（也称被动扩散、被动运送）;水、无机盐、氧气、乙醇等小分子;; ;3．主动运输;主动运输;4．基团转位;提问：磷酸化的益处？ （一）直接完成代谢前活化 （二）防止营养物从细胞内流失； （三）保持营养物在细胞内的低浓度;;比较项目 ;第三节 微生物的产能代谢;一、产能代谢与呼吸的关系;一、产能代谢与呼吸的关系;一、产能代谢与呼吸的关系;ATP含有高能磷酸键（31.4KJ），但仅是能量的暂时贮存物质，如果能量确实过剩，不能用ATP，而用其他内含颗粒来长期贮存。;二、呼吸类型 根据最终电子受体可将微生物呼吸分为：发酵、好氧呼吸、无氧呼吸三种。;糖酵解分为两大步骤： （1）预备反应，不发生氧化还原反应。产物是3－磷酸甘油醛。 （2）氧化还原反应，产生ATP，产物为丙酮酸，进一步发酵可产生乙醇和CO2。 整个过程，1mol葡萄糖转变成2molATP，2mol乙醇， 2mol水， 2molCO2 ，即产生能量2×31.4KJ＝62.8KJ。产能率为62.8/238.3＝26％;丙酮酸是微生物糖酵解的必然产物，如果进一步发酵，可形成多种产物。因此，有可将发酵分为很多类型：如乙醇发酵；混合酸发酵等。其中，混合酸发酵是多数大肠杆菌的特征。;另外，还可以用甲基红试验进行区别。 产气杆菌在混合酸发酵时会产生中性的乙酰甲基醇，但大肠埃希氏杆菌的混合酸发酵产生多种有机酸，使培养液呈酸性，p H在4.2左右甚至更低。 当用甲基红滴入时 ，大肠埃希氏杆菌培养液为红色，称之为阳性反应；产气杆菌培养液为橙黄色，为甲基红反应阴性。;不同的发酵类型及其有关微生物;2.好氧呼吸 好氧呼吸是一种最普遍和最重要的生物氧化方式，其特点是在有氧条件下,底物按常规方式脱氢后，经完整的呼吸链递氢，最终由分子氧接受氢并产生水和释放能量。;好氧呼吸第一阶段：EMP途径形成丙酮酸，丙酮酸氧化脱羧反应是连接糖酵解和三羧酸循环的中间环节。;三羧酸循环（TCA）（Krebs 循环、克雷伯斯循环、柠檬酸循环）;三羧酸循环;电子传递和ATP的合成;TCA循环的能量问题 1mol丙酮酸在TCA循环中，可产生4mol的NADH2,1 molNADH2通过电子传递体系重新氧化成为NAD，同时可生成3 mol ATP，则4molNADH2被氧化生成12molATP。 可生成1 molGTP，1 mol的GTP转变成1 molATP； 可生成1molFADH2, 1 mol的FADH2转变成2 molATP; 则， 1mol丙酮酸在TCA循环中共生产12+1+2＝15molATP。; 问题：为什么是产生38molATP?;1mol葡萄糖可在EMP途径