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SYBR Green I使用介绍 SYBR Green I 核酸染料简介 SYBR Green I 是高灵敏的 DNA 荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单，无须脱色或 冲洗；至少可检出 20pg DNA，高于 EB 染色法 25-100 倍。SYBR Green I 与 dsDNA 结合荧光 信号会增强 800-1000 倍，用 SYBR Green I 染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低，可适 用于多种电泳分析。 SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电 场凝胶电泳和毛细管电泳等。 SYBR Green I 与双链 DNA 的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学 中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4 连接酶等）没有抑制作用；另外，SYBR Green I 与 EB 相比，诱变能力大大降低。 SYBR Green I 核酸染料特点 ● 灵敏高：至少可检出 20pg DNA，高于 EB 染色法 25-100 倍。 ● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。 ● 操作简单：无须脱色或冲洗。 ● 适用范围广：可适用于多种电泳分析。 ● 使用方便：不影响其它修饰酶作用。 ● 经济：价格比银染便宜。 电泳用 SYBR Green I 使用方法简介 一、SYBR Green I 预染色方法 1、该方法适于琼脂糖凝胶电泳和 PAGE 凝胶电泳。 2、工作液的配制：用电泳缓冲液将 10000×的 SYBR GreenⅠ稀释 100 倍，即为 SYBR Green Ⅰ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置 2-8℃冷藏一个月以上。 3、制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。 4、样品染色：向分析样品中加入 SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置 10 分钟， 热线电话：021－5446 0832 8009881995 E-mail:master@ 网址： 使 SYBR GreenⅠ与样品中 DNA 充分结合。SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的 1/10。 5、DNA Marker 染色：将 5μL DNA Marker 和 5μL DNA Marker 稀释液和 1μLSYBR Green Ⅰ工作液混匀，室温放置 5 分钟，使 SYBR GreenⅠ与 DNA 充分结合。 6、上样、电泳：按常规操作。 二、SYBR Green I 后染方法 1、按照常规方法进行电泳。 2、 用 PH 7.0 - 8.5 的缓冲液（如：TAE，TBE 或 TE），按照 10000：1 的比例稀释 SYBR Green Ⅰ浓缩液，混匀，制成染色溶液。 3、 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温 振荡染色 10-30 分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上 染色，将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上，让工作液均匀地覆盖整个胶板，并染色 30 分 钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。 三、SYBR Green I 使用注意事项 1、 在SYBR GreenⅠ预染色方法中，电泳时间不要超过 2 小时，否则 SYBR GreenⅠ会从 DNA 上分离出来，会产生弥散状条带。 2、在常规用酒精沉淀核酸的过程中，SYBR Green I 可以全部从双链核酸上去掉。 3、如果想对用 SYBR Green I 染过的胶进行 Southern blots，建议在预杂化和杂化溶液中加 入 0.1%- 0.3% 的 SDS。 4、 在紫外照射透视下，与双链 DNA 接合的