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- 2017-04-23 发布于湖北
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第一次作业
1、什么是发酵?什么是发酵工程?
2、简述典型好气性发酵的一般工艺流程
第二次作业
1、菌种选育具体有哪些方法?
2、菌种保藏的原理是什么?有哪些方法?
3、设计一个从自然界筛选产淀粉酶的高温菌
的实验方案,详细说明主要步骤。
;第三次作业
1、种子扩大培养的一般流程是怎样的?
2、影响种子质量的因数有哪些?
;第3章 灭菌与空气净化; 除菌:用过滤的方法除去空气或液体中的
微生物及其孢子。
3.1.1 发酵工业常用的灭菌方法
1、干热灭菌法
2、湿热灭菌法
3、射线灭菌法
4、化学药剂灭菌法
5、过滤除菌法
;3.1.2 湿热灭菌原理
1、微生物的热阻
致死温度:杀死微生物的极限温度
致死时间:在致死温度时,杀死全部微生
物所需的时间
热阻:指微生物在某一特定条件(温度和
加热方式)下的致死时??
表3-1 几种微生物对湿热的相对抵抗力
微生物名称 大肠杆菌 细菌芽孢 霉菌孢子 病 毒
相对抵抗力 1 3 000 000 2~10 1~5;2、微生物的热死规律——对数残留定律
实验证明,微生物营养细胞的均相热死灭动力学符合化学反应的一级反应动力学,即:
(1)
;取边界条件t0=0,N=N0,对(1)积分得
式中:N0为开始灭菌时原有活菌数(个),
Nt为经过t时间灭菌后的残留菌数(个)
K为反应速率常数(min-1); 由上式可知灭菌时间取决于污染程度N0、灭菌程度Nt和K值 。
①一般只考虑细菌的芽孢作为计算依据。
②如果要求达到彻底灭菌,即Nt=0则所需灭菌时间t ∞,这在实际生产上不可行。在实际设计时常采用Nt=0.001,即在1000批次灭菌中有一次失败。
③反应速率常数K是微生物耐热性的一种特征,它随微生物种类和灭菌温度而异。相同温度下,K值越小则微生物越耐热。同一种微生物在不同灭菌温度下,K值不同。灭菌温度越低,K值越小;灭菌温度越高,K值越大 ; 因此提高灭菌温度,K值增大,灭菌时间显著缩短。
3.1.3 培养基的灭菌
1、培养基灭菌温度和时间的选择
在化学反应的一级反应动力学类型中,当其他条件不变时,反应速率常数与温度的关系可用阿伦尼乌斯(Arrhenius)方程表示:
; 由于杂菌死亡属一级动力学反应,大部分培养基营养成分的破坏为一级分解反应。在灭菌时,当温度由T1升到T2,灭菌速率常数K和培养基成分破坏速率常数 K’都变化。灭菌速率常数K值在T1、T2时分别为:
将两式相除并取对数得:
(1)
; 同样,灭菌时培养基营养成分的破坏也可得类似关系:
(2)
将式(1)和式(2)相除得:
; 由于杀死细菌芽孢的活化能E大于营养成分破坏的活化能E‘,因此 ,即随温度升高,灭菌速率常数增加的倍数大于营养成分破坏速率常数增加的倍数,也就是说温度升高,杂菌死亡速率大于培养基成分破坏的速率。; 达到相同的灭菌效果,提高灭菌温度可明显缩短灭菌时间,并减少培养基营养成分的破坏,这就是通常说的“高温短时灭菌法”。如将芽孢杆菌和维生素B2放在一起灭菌,当温度维持118???加热15min,可杀死99.99%的细菌芽孢,维生素B2破坏率为10%;而在120℃时加热1.5min,细菌芽孢死亡率仍为99.99%,而维生素B2破坏率为5%。;
2、培养基的灭菌方法
(1)分批灭菌
也称实消、实罐灭菌、间歇灭菌,是指将配制好的培养基输入发酵罐内,直接通入蒸汽将培养基和所用设备一起进行灭菌的操作过程 。; 在发酵罐中进行实罐灭菌,是典型的分批灭菌。全过程包
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