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实验七 绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别 (设计性实验) 绞股蓝为葫芦科植物Gynostemma pentaphyllum (Thunb.)干燥全草，又名七叶胆。从绞股蓝中分得皂苷已达80余种，其中七种与人参皂苷完全相同，故绞股蓝又有“南方人参”的美誉。绞股蓝总皂苷是绞股蓝全草中有效成分，具有降血脂、降血糖、抗肿瘤、抗衰老、保护肝脏及增强机体免疫功能等作用。主要药理实验证明绞股蓝总皂苷对肿瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用。对人体有滋补、镇静、催眠、促食欲、降血脂、降胆固醇、降转氨酶、延缓衰老等作用。 实验目的： 1。掌握D-101大孔吸附树脂分离纯化绞股蓝总皂苷的原理和实验操作方法； 2。掌握查阅文献资料的方法和思路 3。熟悉皂苷类成分的性质及鉴别方法 仪器与试药： （一）仪器 D-101大孔吸附树脂 玻璃层析柱（2.0X50） 圆底烧瓶（1000ml） 试管 SHB-循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅 玻璃仪器气流烘干器 ZF-2型三用紫外仪 电热恒温干燥箱 烧杯 空气回流管 移液管（10ml、5ml） 锥形瓶（100ml） 硅胶G（薄层层析用） 滤纸 研体 球形冷凝管 蒸发皿 （二）试药 绞股蓝药材 95%乙醇 蒸馏水 盐酸 氢氧化钠 冰醋酸 醋酐 浓硫酸 α—萘酚试剂 人参皂苷Rbl对照品乙醇液 正丁醇 乙酸乙酯 喷5％磷钼酸乙醇液 活性炭 实验原理： 绞股蓝总皂苷有较好的水溶性，可用水为提取溶剂，因为绞股蓝皂苷分子中含有非极性部分三萜母核，故可使其在非极性大孔树脂上能较好地被吸附，相反，极性较大的成分如糖类则在非极性大孔树脂上难以吸附，因而选用非极性大孔吸附树脂D101型可将绞股蓝水提物中的总皂苷与糖类等水溶性成分较好地分离，最后用活性炭脱色，从而达到纯化的目的。 大孔吸附树脂 颜色：白色、乳白色至微黄 物理化学性质稳定，不溶于任何酸、碱及 有机溶剂，加热不溶，可在150℃以下使用 含水量：60～80％ 堆积密度：0.6～0.9 适用的新药类型： 1.中药有效成分的粗分和精制 2.单味中药有效部位的制备 3.中药复方有效部位的制备 注意： ①性质相似成分可混煎后一起制备 ②各味药所含成分性质差别较大的复方应单独提取后，再制备 ③单味药有效成分性质差别较大的应分别制备 四、实验内容： 1)提取 绞股蓝粗粉15g+95%乙醇150ml 残渣+95%乙醇100ml合并两次滤液浓缩物。 ***据相关文献记载，在绞股蓝皂苷的提取过程中，不同的提取条件对绞股蓝皂苷的提取率有很大影响，提取温度和浸提次数的影响明显大于乙醇浓度和料液比，其影响依次是浸提次数、浸泡温度、乙醇浓度、料液比。最佳提取工艺为：1:12的料液比加入浓度为70%的乙醇溶液，在40°下浸泡，共浸提6d，浸提3次，即每2d浸提1次。 （绞股蓝皂苷最佳提取条件的研究： 沈宏伟、肖彦春、车仁国等） 2)分离 绞股蓝提取液过大孔吸附树脂柱 流出液接近无色时，改用水洗，至流出液pH接近7为止收集醇洗脱液至无绞股蓝皂苷洗出。 醇洗脱液滤液回收乙醇至小体积 得白色鳞片状结晶，为绞股蓝总皂苷。大孔吸附树脂回收。 3)鉴别 1．呈色反应 （1）醋酐一浓硫酸反应 取绞股蓝总皂苷少许，置蒸发皿中，滴加冰醋酸1ml溶解，再加1ml醋酐，然后于溶液边沿滴加浓硫酸，观察颜色变化。 （2）molish反应取绞股蓝总皂苷少许于试管中，加乙醇1ml溶解，滴加lmlα—萘酚试剂，然后沿试管壁加入2ml硫酸，不要摇动，观察两液交界面的颜色。 2．薄层色谱鉴别 薄层板：硅胶H—CMC-Na板。  点样：纯化的绞股蓝皂苷乙醇液、人参皂苷Rbl对照品乙醇液。 展开剂：正丁醇-乙酸乙酯-水（4：l：5，上层）。 展开方式：上行展开。 显色：喷5％磷钼酸乙醇液110℃加热显色（约5min）；或喷硫酸-甲醇（1：1）溶液，105℃加热显色。 观察记录：显色前后置日光及紫外光灯（365nm）下检视，观察斑点颜色及位置，记录图谱。 五、实验结果： 1。详细记录实验内容。 2。详细记录定性鉴别结果，并绘制色谱图，计算Rf值。 3。总结实验过程中遇到的问题和解决方法。 ①绞股蓝提取液用碱液调至pH9～10后，应放置适当时间，便于析出的粒子聚集以利过滤。在碱性条件下，绞股蓝皂苷能较好地吸附于树脂上而其它杂质成分形成离子型化合物随溶液流出，利于纯化。②上样速度不宜过快。过快影响树脂与溶质间的吸附交换平衡，导致吸附容量下降。③皂苷经树脂吸附后，洗除在树脂表面或内部残留的