高中生物同步课件：6.2DNA片段的扩增——PCR技术(中图版选修1).pptVIP

第2节　DNA片段的扩增——PCR技术;学习导航 1.理解PCR扩增DNA片段的原理。[重点] 2.尝试PCR技术的基本操作和应用。 [难点];;二、PCR及其过程 1.概念：PCR即聚合酶链式反应，实际上是在_____模拟细胞内的_______________，形成大量__________的DNA片段。;2.过程 ;氢键;判一判 (1)细胞内DNA复制和PCR技术所需的引物一样，都是RNA。(×) (2)经PCR技术合成的DNA分子中，每条单链都含有引物。(×) (3)PCR实验的原理和操作都十分复杂，不易于操作。(×) (4)经过高温变性、低温复性和中温延伸三步操作，DNA片段可呈指数增长。(√);三、实验操作 1.准备 (1)为了避免__________等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、吸头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行_________。 (2)如果没有PCR仪，可以设置3个恒温水浴锅，温度分别为______、______和______，然后按要求在3个水浴锅中来回转移PCR的微量离心管即可。;PCR热循环;想一想 决定PCR反应特异性的原因有哪些？ 【提示】　待扩增DNA片段的特异性。;;;特别提醒　①PCR反应需要可变的温度，而体内DNA复制需要稳定的温度。 ②DNA解旋酶的作用是使DNA两条链的氢键断开；DNA聚合酶的作用是将单个脱氧核苷酸加到已有的单链片段的3′端上，需要模板; DNA连接酶连接的是两条DNA片段的缺口，不需要模板。; PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同，它们是(　　) ①PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA ②PCR过程不需要DNA聚合酶 ③PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的 ④PCR过程中，DNA不需要解旋，直接以双链DNA为模板进行复制;A．③④　　　　　　 B．①② C．①③ D．②④ 【解析】　PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比较，主要有两点不同：①PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA，长度通常为15～40个核苷酸。②PCR过程中，DNA解旋不依赖解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的。 【答案】　C;变式训练 (2012·成都七中高二检测)下列关于DNA复制和PCR的描述中，正确的是(　　) A．DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5′端延伸DNA链 B．DNA复制不需要引物 C．引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合 D．PCR扩增的对象是氨基酸序列;解析：选C。由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3′端延伸DNA链，故DNA复制需要引物，而且它与DNA母链通过碱基互补配对结合。PCR扩增的对象是DNA，而不是氨基酸。;2.PCR扩增过程 ;图示：;3.DNA扩增数目的理论计算 理论上DNA扩增呈指数增长。若只有一条DNA模板，则复制n次后有2n条；若一开始有m条DNA模板，则复制n次后有m×2n条；实际操作过程中，由于无关变量的影响，一般来说实验值要略小于理论值。; 近20年来，PCR技术(多聚酶链式反应)成为分子生物学实验室的一种常规实验手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如图)，在短时间内,将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，从而使实验室所需要的遗传物质不再受限于活的生物体。;(1)加热使DNA双链间的__________键完全打开，称为__________；而在细胞中是在__________酶的作用下进行的。;(2)如果只需要大量克隆模板DNA中间的某个特定区段，应该加入__________种特定的引物。当温度降低至55 °C时，引物与两条“舒展”的模板的特定位置结合，在DNA聚合酶的作用下，只能在引物的________端连接脱氧核苷酸，两条子链的延伸方向都是________________________________________________________________________。;(3)PCR技术的必需条件，除了模板、原料、酶之外，至少还有三个条件，即液体环境、适宜的__________和________，前者由__________自动调控，后者则靠__________来维持。 (4)通过PCR技术使DNA分子大量复制，如果将一个用15N标记的DNA分子放入试管中，以14N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制四次之后，则15N标记的DNA分子占全部DNA分子总数的比例是________。;【解析】　(1)PCR技术利用热变性原理使DNA双链之间的氢键断裂，称为变性，而在细胞内是在解旋酶的作用下使氢键断裂。(2)P