厄贝沙坦对高脂饮食兔肝脏SRBI活性影响.docVIP

　　高脂血症是一种与遗传及环境因素相关的临床多发病、常见病，也是以动脉粥样硬化为基础的冠心病的主要危险因素之一。人群调查与实验研究表明，高脂血症与冠心病的发生呈显著正相关〔1〕，而高密度脂蛋白水平与冠心病的发生呈显著负相关〔2〕。血脂水平的变化是多种因素作用的结果，如饮食及遗传因素等。而在脂代谢平衡中，肝脏作为外源性和内源性脂代谢途径的交汇点及调节中心，发挥着重要的作用。厄贝沙坦是临床常用的一种降压药物，本文就厄贝沙坦对高脂血症兔肝脏B族I型清道夫受体(SR-BI)活性的影响进行了研究，以探讨其降压的同时对脂代谢的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 实验动物 　　30只健康日本长耳兔(山东省农科院)，体重为2.0～2.5 kg，均为雄性。 　　1.1.2 主要试剂与仪器 　　Modular DPP美国罗氏日立生化仪(美国罗氏公司)；总胆固醇(TC)直接法检测试剂盒、甘油三酯(TG)直接法检测试剂盒、高浓度脂蛋白胆固醇(HDL-C)直接法检测试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)直接法检测试剂盒(成都迈克科技有限责任公司)；WMK-08型电热恒温培养箱(上海精宏公司)；日本OLYMPUS BH-2型光学显微镜和C-35AD-2型显微镜照相机(日本OLYMPUS公司)。兔抗SR-BI(一抗)、即用型链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫组化试剂盒(内含生物素化山羊抗兔IgG(二抗))、即用型显色剂(DAB)显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)。 　　1.1.3 饲料 　　普通饲料为优质兔哺乳饲料；高胆固醇饲料含有胆固醇0.5%，猪油5%，基础饲料94.5%。 　　1.2 方法 　　1.2.1 动物分组与处理 　　日本长耳兔30只，按体重随机分为3组，即对照组、模型组及实验组，每组10只。对照组以普通饲料连续喂养24周，模型组以高胆固醇饲料连续喂养12周，12周后改用普通饲料连续喂养12周计24周。实验组以高胆固醇饲料连续喂养12周，饲料及喂养方法同模型组；12周后改用普通饲料连续喂养12周。并同时给予厄贝沙坦75mg/d灌胃，自由饮水，共计24周。饲料喂养均为120～140 g/d。 　　1.2.2 血脂测定 　　于实验前及24周末，兔禁食12 h以上，经其耳缘静脉抽血2 ml，静置30 min后离心取血清，酶法检测总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的浓度。 　　1.2.3 肝脏病理形态学观察 　　实验结束后，处死动物，取出肝脏，多点取材，多聚甲醛固定，常规石蜡切片，苏木素-伊红(HE)染色，于光镜下观察各组兔肝脏病理改变。 　　1.2.4 肝组织SR-BI的表达 　　将切片脱蜡至水化，滴加即用型3%H2O2，室温下孵育10 min以灭活内源性过氧化物酶的活性。磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3次，正常山羊血清封闭，室温孵育30 min，倒掉血清，加入稀释的兔抗SR-BI，4 ℃过夜。PBS冲洗3次，滴加稀释的生物素化山羊抗兔IgG，37 ℃孵育30 min。PBS冲洗3次，滴加DAB显色，苏木素-伊红复染，中性树胶封固，自然干燥。显微镜下观察，参照Fromowitz阳性细胞半定量分级法〔3〕判断结果。 　　1.3 统计分析 　　应用SPSS 11.0统计软件进行方差分析和χ2检验。 　　2 结 果 　　2.1 兔血浆脂质水平变化 　　(表1)对照组兔实验前、后TC、TG、HDL-C及LDL-C水平之间差异无统计学意义。实验开始时模型组兔TC、TG、HDL-C、LDL-C与对照组比较，差异无统计学意义；实验后TC、TG、LDL-C升高，与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.01)；HDL-C与对照组比较，差异无统计学意义。实验开始时实验组TC、TG、HDL-C、LDL-C与对照组比较，差异无统计学意义；治疗后TC、TG、LDL-C升高，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；与模型组比较，差异无统计学意义。表1 兔血浆脂质水平指标检测(略)注：与对照组比较，a P＜0.01；与模型组比较，b P0.05。 　　2.2 肝组织病理检查(图1～3) 　　切片HE染色后在普通光镜下观察，可见对照组肝小叶结构正常；模型组肝小叶结构不够清晰，肝细胞大量脂肪变性，部分肝细胞有轻度异型性；实验组肝细胞结构欠清晰，部分肝细胞围绕中央静脉放射状排列，肝细胞部分脂肪变。 　　2.3 肝组织SR-BI的表达(图4～6) 　　光镜下可见蓝色细胞核及不均匀分布的棕色颗粒，对照组棕色颗粒沉着最少，模型组与实验组类似，棕色颗粒沉着较多。对照组兔肝脏SR-BI的表达阳性率为90%，强阳性率为10%；模型组兔肝脏SR-BI的表达较对照组增加，