第一节DNA的生物合成.ppt

第十二章 核酸的生物合成;现代生物学已充分证明，核酸是生物遗传的物质基础。 除少数RNA病毒外，几乎所有的生物均以DNA为遗传信息的载体。 ;1958年，Crick提出了遗传信息的“中心法则”。DNA通过复制（replication）将遗传信息由亲代传递给子代；通过转录（transcription）和翻译（translation），合成特异的蛋白质，以执行各种生命功能，使后代表现出与亲代相似的遗传性状。DNA的复制、转录和翻译过程就构成了分子生物学的中心法则（central dogma）。 补充：在某些情况下，RNA也可以是遗传信息的基本携带者。如：RNA病毒能以自身RNA分子为模板进行复制；致癌RNA病毒还能通过逆转录的方式将遗传信息传递给DNA。;第一节 DNA的生物合成;一、DNA的自我复制;1958年Meselson 和Stahl 用同位素示踪和密度梯度离心的方法证明了DNA的半保留复制。 该实验首先将大肠杆菌在含15N的培养基中培养约12代，使其DNA中的碱基氮均转变为15N。然后将大肠杆菌移至只含14N的培养基中同步培养一代、二代。分别提取DNA，作密度梯度离心，将具有不同密度的DNA分离开。;按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA的碱基序列一致，即子代保留了亲代的全部遗传信息，体现了遗传的保守性。 遗传的保守性，是物种稳定性的分子基础，但不是绝对的。;模板 底物 解螺旋酶 单链结合蛋白 拓扑异构酶 引物、引物酶 DNA聚合酶 DNA连接酶; DNA复制是模板依赖性的，必须要以亲代DNA链作为模板。亲代DNA的两股链解开后，可分别作为模板进行复制。 ;以四种脱氧核苷三磷酸为底物，即dATP、dGTP、dCTP、dTTP。;解螺旋酶（helicase），又称解链酶，是用于解开DNA双链的酶蛋白。 大肠杆菌中的解螺旋酶：DnaB蛋白、Rep蛋白 每解开一对碱基，需消耗2分子ATP，依靠水解ATP提供解链所需要的能量。;单链DNA结合蛋白（single strand binding protein, SSB），是一些能够与单链DNA结合的蛋白质因子。;;5. DNA拓扑异构酶;拓扑异构酶I;拓扑异构酶II也叫旋转酶（gyrase），在有ATP功能的情况下，可引入负超螺旋，可消除复制叉前进时产生的扭曲张力，它和拓扑异构酶I一起共同控制着DNA的拓扑结构。;引物酶（primase）本质上是一种依赖DNA的RNA聚合酶，该酶以DNA为模板，聚合一段RNA短链引物（primer），以提供自由的3’-OH，使子代DNA链能够开始聚合。 引物酶需组装成引发体才能催化RNA引物的合成。;许多与DNA复制直接相关的基因被称为dna基因；不过也有其他不同的名称。 与复制相关的基因：dnaA、dnaB、 …dnaX 相应的基因产物：DnaA、DnaB…DnaX DnaA：辨认复制起始点oriC（origin C）； DnaB：引发体的组分，具有解螺旋酶的活性； DnaC：引发体组分，帮助DnaB结合于起点； DnaG：引物酶，合成前体片段的引物。;引物酶催化合成短链RNA引物分子 ;7. DNA聚合酶; 核酸酶：作用于核酸的磷酸二酯酶称为核酸酶，按其作用位置分为: 1. 核酸外切酶：作用于核酸链的末端（3’端或5’端），逐个水解下核苷酸。 脱氧核糖核酸外切酶：只作用于DNA； 核糖核酸外切酶：只作用于RNA。 2. 核酸内切酶：从核酸分子内部切断3’，5’-磷酸二酯键。;在原核生物中，主要的DNA聚合酶有三种，分别命名为DNA聚合酶 I（pol I），DNA聚合酶II（pol II），DNA聚合酶III（pol III），这三种酶都属于具有多种酶活性的多功能酶。 1999年发现DNA聚合酶?IV、V。 参与DNA复制的主要是pol III和pol I。;DNA聚合酶I：主要功能是参与DNA修复，切除RNA引物并填补其留下的空隙缺口。 DNA聚合酶II：主要功能可能是参与DNA的损伤修复。（具体不祥） DNA聚合酶III：是催化大肠杆菌DNA复制主要的酶。; 原核生物中的三种DNA聚合酶?;真核生物的DNA聚合酶;为了保证遗传的稳定，DNA的复制必须具有高保真性。DNA复制时的保真性主要与下列因素有关： 1．遵守严格的碱基配对规律； 2．DNA聚合酶在复制时对碱基的正确选择； 3．对复制过程中出现的错误及时进行校正。 ;DNA-pol I 的核酸外切酶活性和及时校读;DNA连接酶（DNA ligase）可催化两段DNA片段之间磷酸二酯键的形成，