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Modern Planting 现代种植 早春短命植物节律基因CCA1的核心扩增及初步鉴定 文/韩慧 过提取材料幼苗总RNA，反转录， PCR扩增 1.2.5 DNA凝胶回收 文章以十字花科角毛茛科角果毛 一系列操作获取节律钟CCA1基因的核心片 本实验采用TIANGEN公司的普通琼脂糖 摘 段，为进一步克隆角果毛茛的节律钟CCA1 凝胶DNA回收试剂盒进行回收。 茛幼苗为材料，提取其总RNA， 要 基因全长及对该基因的结构及表达特性的研 收集的DNA产物用1％琼脂糖凝胶电泳 反转录，通过RT-PCR扩增节律 究打下基础。 检测并用凝胶成像系统观察回收效率。 钟CCA1基因的核心片段并对其进 1.2.6 载体连接与转化 行菌液PCR的初步鉴定。实验结 1 材料和方法 a.在0.5mlEppendorf 管加入以下试剂： 果表明，提取的RNA条带清晰、 1.1 试验材料 整齐，经PCR扩增获得了约500bp 1.1.1 供试材料 加入项目 加入量 的片段，经菌液PCR初步鉴定为 试验所用材料角果毛茛种子采自乌鲁木 目的片段（0.1ug/uL） 3μL CCA1基因的核心片段。该核心片 齐市雅玛里克山。 PMD19-T载体DNA（0.1ug/uL） 1μL 段的获得，为进一步克隆节律钟 1.1.2 主要仪器 水 1μL CCA1基因全长及对该基因的结构 立式自控电热压力蒸汽灭菌器，恒温 SolutionⅠ(含连接酶和缓冲液) 5μL 及表达特性的研究奠定一定的基 培养箱，低温高速离心机，分光光度计，超