PCR、DNA提取一般方法.pptVIP

PCR原理+流程; PCR原理;特点;用途;(1)扩增各种蛋白的基因： (2)PCR后的测序：可以很快地测出常规的PCR产物或单链的DNA序列 (3)用于分子进化和种系发育的研究，研究其分子进化及种系发育是很有用的 4)分析和诊断遗传性疾病 (5)对人类HLA基因的多肽性分析，对于某些基因突变，如肿瘤发生的研究等均很有用。;主要过程; 模板DNA的变性;模板DNA与引 物的退火(复性);引物的延伸;PCR的反应动力学 PCR的三个反应步骤反复进行，使DNA扩增量呈指数上升。反应最终的DNA 扩增量可用Y=(1+X)n计算。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数，X表示平(Y)均每次的扩增效率，n代表循环次数。平均扩增效率的理论值为100%， 但在实际反应中平均效率达不到理论值。反应初期，靶序列DNA片段的增加呈指数形式，随着PCR产物的逐渐积累，被扩增的DNA片段不再呈指数增加，而进 入线性增长期或静止期，即出现“停滞效应”，这种效应称平台期数、PCR扩增效率及DNA聚合酶PCR的种类和活性及非特异性产物的竟争等因素。大多数情况下，平台期的到来是不可避免的。 ;PCR扩增物; 所需材料;3)耐热的DNA 聚合酶： ① Taq DNA 聚合酶是从表达克隆嗜热水生菌的DNA 聚合酶基因的大肠杆菌提