引物和探针.ppt

定量PCR实验流程与注意事项;实验流程;DNA模板; 样品的准备 保证样品的质量与均一性 模板的制备 RNA提取、含量、质量 反转录 引物与探针的优化;样品来源;DNA模板;实验流程; 绝对定量与相对定量 使用SYBR或是Taqman探针（单重或多重PCR） 样品与对照组的设置 标准品的选择 看家基因的选择 引物与探针的设计 扩增子的设计 实验循环条件的设计;F;F;多重PCR需要考虑的问题; 绝对定量与相对定量 使用SYBR或是Taqman探针（单重或多重PCR） 样品与对照组的设置 标准品的选择 看家基因的选择 引物与探针的设计 扩增子的设计 实验循环条件的设计;实验中不同样品的作用;重复;对照; 绝对定量与相对定量 使用SYBR或是Taqman探针 对照组的设置 标准品的选择与制备 看家基因的选择 引物与探针的设计 扩增子的设计 实验循环条件的设计;标准品;梯度稀释方法;标准品;标准品; 绝对定量与相对定量 使用SYBR或是Taqman探针 对照组的设置 标准品的选择 看家基因的选择 引物与探针的设计 扩增子的设计 实验循环条件的设计;管家基因的选择标准; 绝对定量与相对定量 使用SYBR或是Taqman探针 对照组的设置 标准品的选择 看家基因的选择 引物与探针的设计 扩增子的设计 实验循环条件的设计;好的引物及扩增子设计;引物设计; BLAST 使用SYBR Green方法时考虑到以后采用探针法 进行多重PCR的可能 测试多个引物对 选择无引物二聚体且扩增效率最高的引物对;探针法;TaqMan探针的设计; 绝对定量与相对定量 使用SYBR或是Taqman探针 对照组的设置 标准品的选择 看家基因的选择 引物与探针的设计 扩增子的设计 实验循环条件的设计;扩增子设计;扩增子二级结构;引物位置;实验流程; 利用SYBR Green I 进行定量试验检测下列指标 扩增效率 重复性 特异性（结合融解曲线分析） 利用琼脂糖凝胶电泳检测下列指标 特异性;认真严格的实验操作;认真严格的实验操作;相同的试剂，不同人操作;实验流程;要清楚数据是如何被分析的，要知道数据处理方法的前提假设。 例如使用2-DDCt方法的前提是目的基因和内参照基因的扩增效率都是100% 要验证这些假设;感谢各位光临！