大学生物实验——核酸提取与检测试题.ppt

大学生物实验——核酸的提取与检测;一、实验目的与要求;二、实验原理;二、实验原理;二、实验原理;二、实验原理;二、实验原理;二、实验原理;三、仪器及试剂 ;四、实验步骤;抽提步骤;4．加入200 μl Buffer GL，涡旋震荡充分混匀。加200 μl 无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。 注意：1) 如果多个样品一起操作，Buffer GL和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入，震荡混匀。 2) 加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。 5．将步骤4所得溶液(包括形成的沉淀)所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。10,000 rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱放回收集管中。 6．向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），10,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。;7．向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），10,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7. 8. 12,000 rpm（~13,400×g）离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR 等）。 9．将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200 μl Buffer GE，室温放置2-5 分钟，10,000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。; 注意事项： 1. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。 2. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1 和Buffer GW2中加入无水乙醇。 3. 使用前请检查Buffer GTL 和 Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀出现，请将Buffer GL和Buffer GTL 于56℃水浴重新溶解。 如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。;;2. 上样： 在样品中加 1μl 10×上样 液，混匀???加入上样孔内，各组按顺序上样 ;琼脂糖凝胶电泳常用试剂;电泳仪的使用方法;五、实验结果与分析;六 思考题;实验结束后整理实验台, 值日生值日!;?一、加样器的使用及注意事项 1、 用途 2、 使用;练习：加样器读数为 100，实际体积各为多少?; 2.3 加样器使用步骤(示教及学生练习)： ; 1、打开电源 2、离心管中的液体为2/3,盖紧盖子,防止离心机被腐蚀。