第01章蛋白质(6版)学案.ppt

蛋白质的结构与功能;西医综合考试大纲;蛋白质(protein)是由许多氨基酸(amino acids)通过肽键(peptide bond)相连形成的高分子含氮化合物。;蛋 白 质 的 分 子 组 成The Molecular Component of Protein;元素组成：C、H、O、S、N 特点：含氮量很接近，平均为16％。 ;一、氨基酸 —— 组成蛋白质的基本单位;H;非极性疏水性氨基酸 极性中性氨基酸 酸性氨基酸 碱性氨基酸;甘氨酸 glycine Gly G 5.97;色氨酸 tryptophan Trp W 5.89;天冬氨酸 aspartic acid Asp D 2.97;几种特殊氨基酸;? 半胱氨酸 ;（二）氨基酸的理化性质;pH=pI;（AA0）;2. 紫外吸收 ;3. 茚三酮反应 ;茚三酮反应 ;二、肽;+;* 肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。;N 末端：多肽链中有自由氨基的一端 C 末端：多肽链中有自由羧基的一端;多肽链;谷胱甘肽(glutathione, GSH);蛋 白 质 的 分 子 结 构The Molecular Structure of Protein;蛋白质的分子结构包括 一级结构(primary structure) 二级结构(secondary structure) 三级结构(tertiary structure) 四级结构(quaternary structure);（一）定义 蛋白质的一级结构指多肽链中氨基酸的排列顺序。;二、蛋白质的二级结构;（三）肽单元; （四）蛋白质二级结构的主要形式;;三、蛋白质的三级结构;纤连蛋白分子的结构域 ;（四）分子伴侣;四、蛋白质的四级结构;蛋白质结构与功能的关系 The Relation of Structure and Function of Protein;一级结构是空间构象的基础 ;一级结构相似的蛋白质，其空间构象与功能也相似。例如，不同哺乳动物的胰岛素。 一级结构中重要氨基酸改变，导致空间构象及功能改变。例如，镰刀形红细胞贫血。 一级结构中非重要氨基酸改变，不导致空间构象及功能改变。例如，不同物种的Cyt C。 比较蛋白质的一级结构，可以了解物种进化间的关系。物种间越接近，一级结构越相似，其空间构象与功能也相似。例如，不同物种的Cyt C。;Hb与Mb都能可逆地与O2结合， Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。;肌红蛋白(Mb)和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线;* 协同效应(cooperativity) ;变构效应(allosteric effect);（三）蛋白质构象疾病与分子病 ;第四节;（一）蛋白质的两性电离 ;（二）蛋白质的胶体性质 ;+;（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固 ; 造成变性的因素 如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等 。 ;若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation) 。;* 蛋白质沉淀 在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集而从溶液中析出，称为沉淀。 变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。 ;（四）蛋白质的紫外吸收;（五）蛋白质的呈色反应;二、蛋白质的分离和纯化;（二）丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀 ;* 免疫沉淀法：将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。 ;（三）电泳;几种重要的蛋白质电泳 *SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的测定。 *等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。 *双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。;（四）层析;蛋白质分离常用的层析方法 * 离子交换层析：利用??蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。 * 凝胶过滤(gel filtration)又称分子筛层析，利用各蛋白质分子大小不同分离。;;;（五）超速离心;因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系，故可应用超速离心法测定蛋白质分子量，但对分子形状的高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用。;2，4二硝基氟苯（DNP）法：常用试剂二硝基氟苯 丹磺酰氯法（Dansyl）法：常用试剂丹磺酰氯 Edman降解法：常用试剂异硫氰酸苯酯;四、蛋白质空间结构测定