病毒感染實验诊断.pptVIP

第四章病毒感染实验诊断 ;然后根据可疑病毒的生物学特点、 机体免疫应答和临床过程，以及 病人当前所处的时机，确定实验 诊断方法。 ;1.对潜伏期短，发病时尚无抗体产 生，可选择测定病毒颗粒、病毒 抗原或核酸。;2.对潜伏期超过十天的感染，可 检测特异性的IgM抗体来进行早 期快速诊断，及区别初次和再 次感染。 ;3.对可在体内形成持续感染或潜伏 感染的病毒，可检测急性期和恢 复期双份血清的IgG抗体有无4倍 以上升高，或直接检测病毒核酸。;4.对原因不明或有新病毒感染时， 应采集标本进行病毒分离，同 时应采取双份血清以确认分离 的病毒为病原体。;5.对同一症状可有多种病毒引起的 情况，应同时检测几种相关病毒 的病毒颗粒、抗原或抗体， 6.对由多个型别组成的病毒可测定 它们的共同抗原。 ;第一节标本采集与运送 ;2.标本种类的选择 根据临床感染 的症状及流行病学资料，判断可 能感染病毒种类，选择相应部位 采取标本。 ;常见分离病毒标本的选择 ;3．常见标本的采集方法 ;(2)脑脊液：以无菌取脑脊液 1～2ml，冰浴立即送检。 在4℃可存放72h。用于分 离柯萨奇病毒、ECHO病毒、 肠道病毒、腮腺炎病毒。;(3)宫颈或阴道拭子：采取病灶部 位分泌物，或将拭子伸人宫颈 约lcm停留5秒取出，冰浴立即 送检。用于分离 HSV、CMV。 ;(4)粪便标本：取2～4ｇ粪便加 10ml运送液立即送检，用于 分离腺病毒、肠道病毒和轮 状病毒。 ;(5)含漱液：用无菌生理盐水让 患者含漱。用于分离流感病 毒、副流感病毒、鼻病毒、 RSV等。 ;(6)喉拭子：用压舌板避免唾液 污染，用拭子采取咽喉部表 面。用于分离腺病毒、CMV、 肠道病毒、HSV、流感病毒等。;(7)尿道拭子及尿液标本：尿道拭 子伸人尿道4cm转动3次，以获 得较多的上皮细胞，用于分离 CMV和HSV。 (8)尸检标本：死亡后尽早采集各 种器官，分别使用器械和容器。 ;二、标本的运送和保存;病毒传送培养基以Hanks液为基础加 灭活的小牛血清。为抑制细菌生长加 青霉素100U／ml和链霉素100μg／ml， 为了抑制真菌的生长加入2．5μg／ml 二性霉素B或40μg／ml制霉菌素。 ;第二节 病毒分离与鉴定;(2)二倍体细胞株：仍保持二倍体 特性。寿命一般为40～50代， 如人胚肺细胞。广泛用于病毒 分离和疫苗制备。 ;(3)传代细胞系：来于肿瘤细胞， 染色体特征类似肿瘤细胞。 常用的有人宫颈癌细胞(Hela)、 人喉上皮癌细胞(Hep-2)。 ;2．鸡胚接种 鸡胚是用于分离粘 病毒科、疱疹病毒、痘类病毒 的较为理想的材料。 ;3．动物接种 动物对病毒的敏感 性是不同的，选择合适动物十 分重要。小鼠、乳鼠、家兔、 豚鼠、猴等常用于分离病毒。 ;常用于病毒分离的细胞 ;三、病毒的鉴定 ;2.动物感染范围及特点 病毒感 染动物的范围、发病的潜伏期。 3.细胞培养特点。 综合上述资料作出鉴定。 ;病毒鉴定的方法;②不出现细胞病变现象。 ③细胞培养液pH的变化。 ;2.中和试验;用于病毒的分型诊断最具敏感和 准确性。也可用于检查患者病后 或人工免疫后，机体血清中抗体 增加情况。 ;3.空斑或蚀斑形成试验 空斑是指在单层细胞中被病毒感染引 起死亡的细胞区域，周围被活细胞包 围。一般而言，一个空斑是由一个感染 性病毒颗粒感染所引起的。不同的病毒 引起的空斑形态和大小不同。可进行病 毒颗粒的计数、纯化，结合中和试验可 进行病毒的鉴定。;4.干扰现象 某些病毒间存在着干扰现象， 如某些型别的鼻病毒能干扰 以后进入的副流感病毒的增 殖，从而阻抑后者的红细胞 吸附作用。 ;5.红细胞吸附及吸附抑制试验;可作为初步鉴定。如果在培养瓶 中加入相应的血凝素抗血清后， 不出现红细胞吸附现象，是为红 细胞吸附抑制试验阳性，可作为 病毒鉴定的依据。 ;4．血凝试验及血凝抑制试验 某些病毒可与一定种类的哺乳 动物或禽类的红细胞产生血凝 现象。加入相应的血凝素抗体 可抑制血凝现象的发生，是为 血凝抑制试验。可作为病毒型 别确定的依据。;5．病毒的大小及形态 可用电子显微镜观察病毒的 大小及形态。 ;6．核酸类型鉴别及序列测定;对病毒核酸特异序列或全序列的 碱基排列测定