高中生物选修一2017-课题3血红蛋白的提取和分离(38ppt).ppt

课题3　血红蛋白的提取和分离;一、蛋白质的提取、分离和鉴定的方法 1.凝胶色谱法——血红蛋白的分离方法: (1)概念:根据_____________的大小分离蛋白质的有效方法,也 称做___________。;(2)原理: ①凝胶 ②分离原理: _________________的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程 _____,移动速度较慢,通过凝胶的时间_____;_____________ _____的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动, 路程_____,移动速度较快,通过凝胶的时间_____。;2.缓冲溶液: (1)作用:在一定范围内,缓冲溶液能够抵制_____________对溶 液pH的影响,维持pH基本不变。 (2)配制:通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成,调节缓冲 剂的_________就可以制得___________________的缓冲液。;3.电泳——血红蛋白的分离或鉴定方法: (1)概念:带电粒子在_____的作用下发生_____的过程。 (2)原理: ①许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有_________ _____,在???定的pH下,这些基团会带上_____或_____。 ②在电场的作用下,这些带电分子会向着_________________ _______移动。 ③电泳利用了待分离样品中各种分子_______________以及分 子本身的_____、_____的不同,使带电分子产生不同的_____ _____,从而实现样品中各种分子的分离。;二、蛋白质的提取和分离过程 1.样品处理:血红蛋白由_____肽链组成,包括两条________和 两条________。每条肽链环绕一个___________基团,此基团可 携带_________或_______________。;(1)红细胞的洗涤: ①目的:___________。 ②方法:;(2)血红蛋白的释放：;(3)分离血红蛋白溶液: 离心后试管中的溶液分为4层,从上往下依次为: 第1层:无色透明的_______。 第2层:脂溶性物质的_______——白色薄层固体。 第3层:_________的水溶液——_____透明液体。 第4层:其他杂质的暗红色沉淀物。 将试管中液体用_____过滤,除去_____________,于分液漏斗中 静置片刻后,分出下层的_________液体。;(4)透析——粗分离: ①过程:取1 mL的_________溶液装入_______中,将其放入盛有 300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的___________中(pH为 7.0),透析12 h。 ②原理:透析袋能使_______自由进出,而将_______保留在袋 内。 ③目的:去除_____________________________。;2.纯化——凝胶色谱操作: 制作___________ 　 装填___________:因为干的凝胶和用_____________的凝胶的 体积差别很大,所以装柱前需要根据色谱柱 的内体积计算所需要的凝胶量。在装填色谱 柱时,不得有_____存在。 　 _________________;3.纯度鉴定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳:判断_____的蛋白质 是否达到要求,需要进行蛋白质___________。鉴定方法中使用 最多的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。;【思考辨析】 1.判断正误 (1)凝胶色谱法分离蛋白质只根据分子大小,与其携带的电荷 性质和大小无关。( );(2)不同蛋白质通过凝胶时,相对分子质量较小的蛋白质易通过 凝胶颗粒,先从层析柱洗脱下来。( ) 【分析】相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道, 路程较长,移动速度较慢,通过凝胶的时间较长,后洗脱下来;而 相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在 凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快,通过凝胶的时间较短, 先洗脱下来。;(3)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白质移动速度与蛋白质分子 大小和其携带的电荷都有关系。( ) 【分析】由于在凝胶中加入了SDS,其所带负电荷的量远远大于 蛋白质分子原有的电荷量,因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷 差别,使电泳迁移速率完全取决于分子的大小。;(4)透析过程中,用到的透析袋是一层选择半透膜,具有选择透 过性。( ) 【分析】透析袋是一层半透膜,小分子能通过,大分子不能通 过。但不是一层选择透过性膜,选择透过性是针对有活性的生 物膜来说的。;2.问题思考 (1)鸟类血液和哺乳动物血液中,最好用哪种血液来提取血红蛋白?为什么? 提示：哺乳动物血液。由于哺乳动物成熟红