2613非无菌产品的微生物检测特殊微生物的检测.doc

2.6.13非无菌产品的微生物检测：特殊微生物的检测 1．简介 下述试验用于在指定条件下可被检出的特殊微生物的的存在和限度。 试验设计主要用于检测物质或者制剂是否符合已经建立的微生物质量的要求。当用于这个目的时，下面给出了一些说明操作，包括取样量、结果的解释说明。 其他微生物检测方法包括自动化法只要已被证明其等价于药典方法，则可以使用。 2. 通用方法 按2.6.12章所示进行样品的制备。 如果所检产品有抗菌活性时，请按2.6.12章所述尽可能的消除和中和。 如果样品准备中需要使用到表面活性剂时，其对微生物的毒力和它与灭活剂的兼容性应像2.6.12章中一样体现出来。 3．培养基的促生长与抑制性能，试验方法的适用性和阴性对照 建立有样品的条件下，微生物检测的测试性能状况。当检验条件改变或样品改变时，因影响其测量结果，则应确定其适用性。 3-1 试验菌株的制备 用标准的、稳定的试验菌株悬浮液或者将它们按以下步骤制备。因使用种子批培养保留技术（种子批技术），则用于接种的可用的微生物从原始的第一代开始继代培养不能超过5代。 3-1-1 好氧微生物 将各试验菌株单独的培养于酪蛋白大豆琼脂培养基或酪蛋白大豆肉汤培养基中，条件为 30-35℃，18-24h。将白色念珠菌培养于沙氏葡萄糖琼脂或肉汤培养基中2-3天。温度为20-25℃。 ——金黄色葡萄球菌 例如ATCC 6538,NCIMB 9518,CIP 4.83或NBRC13276 ——绿脓杆菌 例如ATCC9027,NCIMB8626,CIP82.118或NBRC13275——大肠杆菌 例如ATCC 8739,NCIMB 8545,CIP 53.126或NBRC3972 ——沙门氏菌 血清型鼠伤寒沙门氏菌 例如ATCC14028，或血清型奥博尼沙门氏菌 例如NBRC100797,NCTC6017或CIP80.39 ——白色念珠菌 例如ATCC 10231,NCPF 3179,CIP 48.72或NBRC1594 用PH7.0的氯化钠蛋白胨缓冲液或PH7.2的磷酸盐缓冲液来制备菌悬液，在2h内应用或在2-8℃下24h应用。 3-1-2 梭菌属 采用产气荚膜梭菌如ATCC11437（NBRC14293,NCIMB12343,CIP100651）或ATCC19404（NCTC532或CIP79.03）或NBRC14293。在无氧条件下，将梭菌试验菌株培养于富营养培养基中24-48h，温度为30-35℃。然后稀释产气荚膜梭菌的新鲜营养物得到稳定的孢子悬浮液用于实验接种。将稳定的孢子悬浮液在有效期内储存于2-8℃的条件中。 3-2 阴性对照 为了验证实验条件，用所实验准备过程中的稀释剂做阴性对照。它不能有微生物生长。第4 部分的产品检测中也要有阴性对照。如果阴性对照失败，应进行调查。 3-3 培养基的促生长和抑制能力 测试每一批制备好的培养基，和由脱水制备或者按成分制备每一批培养基。 按表2.6.13.-1.验证相关培养基的适用性。 培养基的促生长性能检测：液体培养基 接种少量的（≤100cfu）、合适的微生物菌种于培养基中，在指定温度下培养，时间不超过实验室菌种的最短培养时间。能获得与以前测试过的、经批准的培养基相比较有清晰可见的微生物生长。 培养基的促生长性能检测：固体培养基 用表面扩散法接种少量的（≤100cfu）、合适的微生物菌种于培养基中，在指定温度下培养，时间不超过实验室菌种的最短培养时间。微生物的生长与以前测试过的、经批准的培养基相比较。 培养基的抑制性能检测：固体或液体培养基 接种不少于100cfu的合适菌种于适当的培养基 中，在指定温度下培养，培养时间不少于实验室菌种的最长培养时间。没有试验菌的生长。 培养基的指示性 用表面扩散法接种少量的（≤100cfu）、合适的菌种于适当的培养基中， 在规定温度下培养，时间在以前的菌种培养时间范围内，将菌落的形态和指示性与测试过的、经 批准的培养基相比较。 3-4 检测方法的适用性 按前面4部分的相关段落中的方法准备用于检测的样品，将实验菌种接种于指定的生长培 养基中，独立的接种各试验菌株。取不超过100cfu的菌种用于试验接种。按第4部分中的相关 段落中规定的最短时间进行培养。 按第4部分描述的指示反应必能检测到特殊微生物。 如果产品有抗菌活性时，应进行方法的修正（看2.6.12章中的4-5-3）。 如果给定的产品对某种微生物具有抗菌活性且在检测中规定不能被中和时，我们可视其产品 中无被抑制的微生物。 表2.6.13.1—培养基的促生长，抑制和至少能力 ——培养基特性试验菌株耐胆汁的G-菌的检测肠细菌富营养肉汤培养基-Mossel促生长大肠杆菌、绿脓杆菌