分子生物学 第三章 生物信息传递(上)幻灯片.ppt

第三章 生物信息传递（上） 从DNA到RNA; 转录（transcription) 以DNA单链为模板，NTP为原料，在依赖DNA的RNA聚合酶催化下合成RNA链的过程。;编码链（coding strand） 模板链（template strans）;;第一节 RNA转录的基本过程 第二节 转录机器的主要成分 第三节 启动子与转录的起始 第四节 原核生物与真核生物 mRNA 特征的比较 第五节 终止与抗终止 第六节 内含子的剪切、编辑及化学修释;第一节 RNA 的 转录;随机扩散;启动子（promoter)：是基因转录起始所必需的一段DNA序列，是基因表达调控的上游顺式作用元件之一。;全酶-启动子形成闭合二重复合体； 闭合复合体转变为开放复合体； 整合进最初两个核苷酸，形成一个磷酸二酯键，形成三重复合体；;通过启动子 在酶不需要移动时，即可加入9个核苷酸，但在加入核苷酸过程中，随时可能释放RNA； 起始成功后，释放出σ 因子。;真核生物转录的起始; TFs 帮助RNA聚合酶识别启动子。TFs ( 转录因子）必须先与DNA形成复合物，帮助RNA聚合酶定位到转录起始的位点。 RNA聚合酶和转录因子在DNA上的定位形成前起始复合物，由于转录因子的作用复合物由封闭型转换成开放型。;正常的延伸中，新的磷酸二酯键在特定的活性位点进行； (NMP)n + NTP= (NMP)n+1 + PPi;出现故障时，RNA聚合酶停止前进并回撤； 在RNA的3端切割，形成新的3-OH末端； 重新开始延伸RNA链。;转录的终止;第二节 转录机器的主要成分;催化中心; 核心酶可以DNA为模板合成RNA，但不能在正确的位点起始。起始必须有σ 因子；σ 因子能够提高酶和启动子识别的特异性，同时也降低酶和非特异位点的亲和力。在某些细菌细胞内含有能识别不同启动子的σ 因子，以适应不同生长发育阶段的要求，调控不同基因转录的起始。;T;σ 因子与核心酶的解离-结合对RNA聚合酶功能的影响;聚合酶前进时，将前端的DNA双链解旋，在后方则重新结合。 聚合酶所保护的DNA序列约为40 bp，而解旋的DNA区域大约17 bp，RNA的3端大约有20~30个核苷酸与DNA或聚合酶结合，而其中RNA-DNA杂交区仅约9 bp。;细胞中不同状态RNA聚合酶的数量; ; 真核生物RNA聚合酶一般由8~16个亚基所组成。其中RNA 聚合酶II的两个大亚基（RPB1和RPB2）与细菌核心酶的两个大（β和β）；（RPB3和RPB11）与α亚基同源；RPB6与ω亚基同源。 真核生物RNA聚合酶共性：聚合酶中有两个相对分子质量超过 1 x 105 的大亚基；三类聚合酶有“共享”小亚基的倾向。 ;RNA聚合酶I的转录产物是45S rRNA，经剪接修饰后生成除5S rRNA外的各种rRNA。 RNA聚合酶II在核内转录生成hnRNA，经剪接加工后生成成熟mRNA被运送到细胞质中作为蛋白质合成的模板。 核不均一RNA（heterogeneous nuclear RNA，hnRNA）：核内未被剪接的有内含子的mRNA前体，或是核内mRNA的初级转录产物。;RNA聚合酶III的转录产物是tRNA，5S rRNA，snRNA。 SnRNA（small nuclear RNA），即核内小RNA，主要存在于核内，是核内100~300个核苷酸序列的小型RNA，参与RNA的剪接。;蟹爪;2、转录复合物;RNA聚合酶结合在DNA上时，其长度会发生变化 起始复合物（包括σ 因子）结合DNA的长度为75～80bp 起始延伸复合物结合DNA的长度为55～60bp 一般延伸复合物结合DNA的长度为30～40bp;DNA转录循环理论 1、NTP填补了开放的底物位点，并在活性位点形成磷脂键； 2、处于聚合酶中心的核酸发生位移，其是连接区α螺旋结构由笔直变为弯曲再恢复成为笔直状态，为下一轮RNA的合成留出了空的底物位点。; 转录因子（transcription factor, TF）：真核生物转录起始过程中，除RNA聚合酶之外的其它辅助因子统称为转录因子。;小 结;第三节 启动子与转录的起始;;转录单元 （transcription unit）;启动子区的基本结构;Date;TATA box：位于RNA聚合酶II转录起点上游约-35~ -25 bp处的共同序列TATAAA，绝大多数情况下全部是A-T碱基对，只有少数含有G-C。 CAAT box：在起点上游-78~-70 bp处还有另一段共有序列CCAAT，称为