实验动物胚胎工程[硕].pptVIP

实验动物胚胎工程;;;学会感恩;李嘉诚儿子被绑架的故事;;李嘉诚最喜欢的句子;何谓礼？;何谓智？;知之为知之，不知为不知，是知也。 知之者不如好之者，好之者不如乐之者。 子在川上曰：“逝者如斯夫（像流水一样），不舍昼夜。” 三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 曾子言曰：“鸟之将死，其鸣也哀；人之将死，其言也善。” 子贡曰：“君子之过也，如日月之食焉。过也，人皆见之；更也，人皆仰之。” ;何谓信？;一棵开花的树;朵朵都是我前世的盼望 当你走近 请你细听 那颤抖的叶 是我等待的热情 而当你终於无视地走过 在你身后落了一地的 朋友啊 那不是花瓣 那是我凋零的心 ;第一节 实验动物胚胎工程概述;我国50年代首先对四大家鱼进行人工排卵和授精； 有些专家利用外刺激的方法使未受精的蛙卵出现卵裂。;实验动物胚胎工程主要包括以下几个方面： 一、超数排卵（Superovulation） 二、同期发情（estrus synchronization） 三、胚胎移植（Embryo transfer） 四、胚胎培养（Embryo culture） 五、胚胎保存（Embryo preservation） 六、胚胎分割（Embryo split） 七、体外受精（In Vitro fertilization）;八、显微受精（Microfertilization） 九、胚胎干细胞（Embryonic stem cell） 十、细胞核移植与克隆技术（Nuclear transplation and clone ） 十一、卵的激活与孤雌发育（Ocyte activation and parthenogenetic development）; 第二节 超数排卵（Superovulation）;超数排卵：经外源激素处理的雌性动物，改变性周期，促进超常数的排卵，甚至可以超常数十几倍。 最高排卵数：KM小鼠：83枚/只 兔：88枚/只 金黄地鼠：72枚/只 ;二、超数排卵的意义 充分利用雌性动物的繁殖潜能 在科研上可以在短时间内取得大量的卵和胚胎 在生产中，可以提高优秀动物的繁殖数量，提高产量，增加经济效益。;;人：指在前一周期的黄体期开始应用GnRH激动剂，短方案是指在月经周期的第2天开始应用GnRH（促性腺激素释放激素）激动剂，当卵泡成熟后，给予hCG注射，以促进卵子最后成熟。通常在注射hCG后36-38小时取卵。 取卵 　　医生在B超引导下应用特殊的取卵针经阴道穿刺成熟的卵泡，吸出卵子。 ;;副作用;;第二节 同期发情;;;第三节 胚胎移植;小鼠胚胎移植主要由以下一些步骤组成： 1.结扎公鼠 2.超数排卵 3. 同期发情 4. 胚胎收集和预处理 5.胚胎移植;以小鼠为例：;;以小鼠为例： 2.超数排卵 腹腔注射PMSG 10U，一般选择在中午注射，间隔48小时后注射HCG，光照周期保持12～14h。 ;将注射HCG后的母鼠与正常公鼠合笼，并于第二天早上检查阴道栓，如果见栓说明已经配上种了，计做怀孕0.5天。;3.受体同期发情 选择6－8周龄健康母鼠或经产母鼠为受体母鼠，在给供体母鼠注射HCG并与公鼠合笼的同时，将受体母鼠与结扎公鼠合笼，第二天早上检查阴道栓，有栓的母鼠可用于胚胎移植。;4.胚胎收集和预处理 （1）受精卵的收集和处理 见栓当日的胚胎处于1细胞期。 以脱颈椎法杀死母鼠，暴露子宫、输卵管；剪下子宫、部分输卵管，并置于M2培养液；在体视显微镜下撕开壶腹部，释放受精卵。;;;;随后在新鲜的、不含透明质酸酶的M2中洗涤4-6次; （2）2～8细胞胚胎的收集 可取1细胞受精卵在体外发育而成，也可交配后20–60小时，输卵管中存在有2–8细胞期胚胎。此时卵丘细胞已经脱掉，可用1ml的注射器自输卵管伞口冲得胚胎。 其基本步骤如下： 取输卵管 找到输卵管伞部 将冲卵针插入喇叭口 推压注射器 输卵管另一端收集胚胎 洗涤胚胎 转入培养过程。 ;（3）桑葚胚与囊胚的收集 交配后60–72小时，一些致密的8–细胞胚胎已进入子宫。而桑椹胚和囊胚的收集则一定要从子宫中获得。 采集方法：剪下子宫，在宫管结合部插入冲卵针，推入冲卵液，在子宫 的另一端收集胚胎。;以小鼠为例 （4）胚胎移植;用手术剪切开小鼠的皮肤、肌肉、打开腹腔，暴露卵巢、卵巢脂肪垫，并用镊子夹住脂肪组织，把卵巢、输卵管和一部分子宫角慢慢拉出。 ;将