疟原虫镜检技术120228选编.ppt

泗阳县人民医院检验科 王恒松; 疟原虫的基本形态特征 血片制作与染色 疟原虫计数 显微镜的维护与保养 ; 疟疾是由蚊子传播的寄生虫病，它的病原体是疟原虫。 寄生于人体的疟原虫有4 种 ;疟原虫基本结构;1.核 呈鲜红色，呈圆形或椭圆形。核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松，例如间日疟原虫雄配子体的核。 ;2.细胞浆 蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。;疟原虫基本结构;滋养体期： 早期、晚期滋养体 ;;虫体约占RBC直径的1/3，一个RBC含有一个原虫，偶尔2个 核红色，1个，位于虫体一侧，颇似戒指的红宝石。 胞质较少，淡蓝色，呈环状，中间为大空泡。 ;2 间日疟原虫--晚期滋养体;3 间日疟原虫--未成熟裂殖体 ;4.间日疟原虫-成熟裂殖体;5.1 间日疟原虫--雌配子体;;恶性疟原虫--环状体;恶性疟原虫—大滋养体 ;恶性疟原虫—成熟裂殖体 ; 恶性疟原虫;;与间日疟原虫的环状体颇相似;;;虫体小于正常红细胞,呈圆形 核红，偏于一侧 胞浆呈蓝色 疟色素深褐色;;;环状体; 被寄生的红细胞 ; 寄生的红细胞: 经染色后，因细胞内血红蛋白溶解，轮廓消失，但有时尚留下残骸的“影子”或点彩。 厚血膜由于用血量多，血膜小，细胞重迭，干燥缓慢，各期疟原虫的体积都略为缩小，其中大、小滋养体的形态有较大改变，裂殖体和配子体的形态则变化不大。 ;间日疟原虫; ;PM ;血片中可见; 由于在血膜制备过程中红细胞溶解，因而其原形态消失，且染液和玻片上可能存在杂质等，要根据疟原虫的三个基本要素仔细加以鉴别。 （1)疑似疟色素 厚血膜在制作和染色过程中，血膜上的染料残渣及空气中或耳垂上的尘埃，有时可误认为疟色素。 ;（2）疑似疟原虫核 细菌尤其是球菌或白细胞碎裂后散出的颗粒，常染成红色小点，常与疟原虫的核相似。;薄血膜中常见的血液成分;（5）杂质---类似疟原虫的物质;（6） 形态失常 疟原虫成份丢失。 成份增加。如在多虫感染、多核以及多虫重叠时疟原虫形态构造会有异于正常。 形态改变。恶性疟粗大的环状体。;药物影响。 服氯喹后,大滋养体胞浆停滞发育，失去阿米巴样形态，并发生碎解和色泽加深. 服伯喹后,配子体的核和胞浆破碎，疟色素粗大并相对集中等。 ; 血片的制作与染色 ;血液涂片镜检疟原虫目前仍是确诊疟疾和鉴别虫种的主要方法，玻片清洁与否，血片制作的质量和染色的好坏，直接影响镜检的速度和准确性。 ;血片制作;载玻片的清洗： 新玻片的清洗方法 用加有洗洁精或洗衣粉的热水洗涤，浸于95% 的乙醇中1小时以上 已用过的玻片：用加有洗衣粉的热水洗涤，浸于95% 的乙醇中1小时以上;;取血部位: 指尖 耳垂;;薄血膜的涂制： 取血液1-1.5μl 血滴置于载玻片的中央， 将推片的一端置于血滴之前，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，两玻片保持20-30°角， 推成舌状薄血膜，长约2-2.5CM。; 血片制作 厚血膜的涂制： 取血液4-5μl 血滴置于载片的中央偏右1/3， 由里向外划圈涂成直径为0.8-1厘米 厚薄均匀、圆形厚血膜.; 每张载玻片上分别做1个薄血膜，1个厚血膜。标准血膜的位置如下图所示。 ;厚、薄血膜优缺点;血片染色;; 吉氏染液：染色方法;厚血膜溶血染色; 染色用水和冲洗用水 pH7.0～pH7.2缓冲蒸馏水效果最佳。 先制备好两种贮备液 贮备液I 1/15M磷酸氢二钠（Na2HPO4）溶液 Na2HPO4 9.5 g 蒸馏水 1000 ml 贮备液Ⅱ 1/15M磷酸二氢钾 （KH2PO4 ）溶液 KH2PO4 9.07 g 蒸馏水 1000 ml;缓冲蒸馏水配制 PH M/15 Na2HPO4 M/15 KH2PO4 DW (ml) ( ml) (ml) 7.0 63 37 900 7.1 68 32 900 7.2 73 27 900 缓冲蒸馏水宜用时新鲜配制为好。