凝膠過滤层析法分离蛋白质.pptVIP

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2017-04-24 发布于浙江
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凝膠過滤层析法分离蛋白质.ppt

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凝膠過滤层析法分离蛋白质

实验一凝胶过滤层析法分离蛋白质;二、实验原理;2. 层析技术（色谱技术）;（1）层析系统的基本组成;待分离混合物（A、B）随流动相通过固定相;（2）层析法的分类; 按层析原理分类 ; 按操作形式不同分类 ;（3）层析技术的优点;3. 凝胶过滤层析法（gel filtration chromatography）;;（2）凝胶的特点;（3）凝胶的选择;Sephadex G-50：对多肽及蛋白质的筛分范围(分子量)为: 1500 – 30000 Sephadex G-200：对多肽及蛋白质的筛分范围(分子量)为: 5000 – 80000;B. 琼脂糖凝胶 ( 商品名: Sepharose , Bio- gel – A ) 对实验条件要求高 ( 温度, pH ) ＜40℃ 4.5- 9.0 工作的下限是葡聚糖凝胶工作的上限, 用于大分子物质的分离;C. 聚丙烯酰胺凝胶商品名: Bio – gel – P（生物胶P）;三、实验操作;2. 凝胶选择、制备;制备：将干胶颗粒悬浮于5 ~ 10倍的蒸馏水或洗脱液中充分溶胀，溶胀之后将极细的小颗粒倾泻出去;3. 凝胶装柱;注意点：;4. 平衡;5. 加样;6. 洗脱;缩二脲反应（双缩脲反应）;四、实验结果