细胞生物学技术A 8-流式细胞术.pptVIP

流式细胞术 ---原理、操作及应用;主要内容;1.1 流式细胞术简介;流式细胞术的特点;流式细胞仪的分类;流式细胞仪的发展及商品化;BD公司分析型流式细胞仪;BD公司分选型流式细胞仪;1.2 流式细胞术光信号检测;1.2.1 散射光信号;（二）侧向散射光SSC;（三）散射光的作用;;1.2.2 荧光信号;（二）常用荧光素;核酸荧光染料 PI（碘化丙啶 535, 623） 可选择性的插入核酸双螺旋碱基对中。常用于DNA分析，需要用RNase处理细胞排除RNA对DNA荧光定量的影响；PI不能透过活细胞膜，常用于鉴定死细胞。 7-AAD（7-氨基放线菌素D 545, 647 ） 以插入的方式与DNA链的G-C碱基对结合，不能透过活细胞膜，常用于鉴定死细胞。 DAPI（4,4,6-二脒基二苯基吲哚 358, 456） 可以非嵌入方式与DNA链上的A-T碱基对特异性结合。变异系数明显小于其他染料，一种理想的DNA定量染料。 Hoechst（343, 450）常见为Hoechst33342和Hoechst33258，非嵌入的方式与DNA链上的A-T碱基对结合。能对活细胞染色，用于活细胞DNA定量分析，如精子分选；还用于侧群细胞的分选。 PY（派若宁 560, 573） RNA染料，能进入活细胞。 AO（吖啶橙 509, 525） DNA、RNA染料，染色后DN