2004-轮状病毒检测技术——xxxx——综述.pdfVIP

维普资讯 中 国 生 物 工 程 杂 志 第 24卷第 5期 CHINAB10IECHN0L0GY 2004年 5月 轮状病毒检测技术* 王志宇 王健伟 何深 3韩金祥 洪 涛 (1山东省病毒学研究所山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室 济南 250062) (2中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 北京 100052 3山东大学医学院 济南 250012) 摘要 轮状病毒是人和动物急性腹泻的重要病原，对轮状病毒进行快速、准确的检测对于疾病监 测和疫情控制极为重要。从病原学、免疫学以及基因检测三方面，总结了轮状病毒检测技术的发 展状况，重点介绍了较为成熟的免疫学技术，最新发展的实时荧光定量 PCR、核酸序列依赖的扩 增等分子生物学新技术，并对未来轮状病毒检测技术的发展趋势进行了展望。 关键词 轮状病毒 检测 轮状病毒 (rotavims，RV)是全世界范围内人和 用分离培养技术检测RV的灵敏度较低，需要 动物急性腹泻的主要病原之一，根据 VP6的抗原 特殊培养条件，且 目前只有 A组 RV可以培养，所 性，目前将其分为 A～G7个组。其中，A组 RV是 以对于RV的基础研究和临床诊断价值有限。 秋冬季婴幼儿腹泻的最重要病原 ，在发展 中国家， 2 免疫学检测技术 每年约有 87万儿童死于轮状病毒感染…；B组 RV 由我国洪涛等发现，主要感染青壮年，20年前在我 目前在轮状病毒的检测技术 中，可靠性和实用 国曾造成大规模暴发性腹泻流行 ；C组 RV主要 性符合要求的依然是WHO推荐的免疫学技术。大 感染青少年，主要引起散发流行 。 目前国内虽然 部分免疫学技术的检测对象是病人粪便等标本中 已经研发了RV疫苗，但其效果还需要观察，因此 的RV抗原。在乳胶凝集试验(LA)、免疫标记技术 RV的预防控制还将是公共卫生工作的长期任务， [包括酶免疫测定 (EIA)、放射免疫测定(RIA)、免疫 这一工作的开展离不开快速、准确的RV实验室诊 金染色法(immunogoldstaining，IGS)等技术]的基础 断技术 。本文对近 20年来 RV检测技术的进展情 上，随着新标记物的应用以及固相载体技术和抗体 况进行简要介绍 。 制备技术的发展，免疫定量技术，如时间分辨荧光 免疫测定 (time．resolvedfluoro．immunoassay，TR．IFMA 1 经典病原检测技术 或 TrFIA)和定量乳胶凝 集试 验 (quantitativelatex RV的经典病原检测方法主要包括电镜技术和 agglutinationtechnique，QLAT)等免疫学新技术相继 分离培养。电镜技术具有快捷、简便的优点。相对 用于RV的检测，不仅简化 了检测步骤，而且提高 于单纯依赖形态学观察的普通负染电镜技术，免疫 了免疫学方法检测 RV的特异性和灵敏度。 电镜技术 (immuneelectronmicroscopy，IEM)通过在 传统的酶免疫测定 (enzymeimmunoassay，EIA) 电镜下检测特异的凝集反应或利用特异的抗体标 需要长时间的孵育和多次洗涤，并不真正适用于 记物检测抗原物质，具有更高的灵敏度和特异性。 Rv的快速诊断。固相酶免疫测定技术(solidphase 然而，由于病毒颗粒易于降解常常影响正确诊断， enzymeimmunoassay，SPEIA)的特异性抗原抗体反应 并且 电镜设备昂贵，一般基层单位无法普及 ，故 电