抗流感病毒单克隆抗体的制备与鉴定探索.pptVIP

;;1.文献综述;1.2 流感病毒检测技术 1.2.1 病毒的分离鉴定 1.2.2 血清学诊断技术 血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验 琼脂凝胶扩散试验（AGID） 神经氨酸酶抑制试验（NIT） 病毒中和试验（NT） 免疫荧光技术（IFT） 酶联免疫吸附试验 （ELISA）;1.2.3 分子生物学诊断技术 ;2 单抗的制备与鉴定2.1 研究目的与意义;2.1 研究目的与意义; 流感病毒的HA蛋白具有亚型特异性，但NP蛋白却相对保守。 利用NP蛋白和HA蛋白分别有望建立一种所有亚型禽流感病毒的检测方法和诊断流感病毒亚型的方法。而单克隆抗体由于由于特异性以及高度亲和力，用于病毒学诊断时相较于多抗有许多优点。 本研究利用杂交瘤技术获得了抗禽流感病毒NP蛋白和H3亚型禽流感病毒HA蛋白的单抗，为对禽流感病毒的进一步研究和建立针对所有亚型禽流感病毒和H3亚型的检测方法奠定基础。 ;2.2 材料方法2.2.1 细胞、病毒与动物;2.2.2 培养基及主要试剂;2.3.3 方法;杂交瘤细胞上清检测 杂交瘤细胞的克隆化（有限稀释法） 杂交瘤细胞染色体数的检测 单克隆抗体的生产、纯化和效价测定 单克隆抗体亚类鉴定 单抗特异性鉴定 间接免疫荧光法检测单克隆抗体 ;2.3 结果与分析;抗NP杂交瘤细胞上清ELISA检测结果(OD630);2.3.2 抗HA 蛋白杂交瘤细胞的筛选;;表2－2 单克隆抗体亚型及相应杂交瘤细胞染色体计数;;表2－3 抗NP蛋白杂交瘤上清和腹水的ELISA效价测定结果(OD630);表2－4 抗H3 HA蛋白杂交瘤上清和腹水的效价测定结果;2.3.6 单抗特异性鉴定;2.3.7 间接免疫荧光 ;抗NP单抗与H3N8感染MDCK的IFA检测 ;抗H3 HA单抗与H3N8感染MDCK的IFA检测 ;抗NP单抗与AIV H9亚型感染MDCK的IFA检测 ;抗H3 HA单抗与AIV H9亚型感染MDCK的IFA检测 ;F Positive control;G SP2/0;3 讨论; 3.2 关于抗NP蛋白单抗 由于禽流感病毒NP蛋白相对保守，因此可以使用抗NP蛋白的抗体来检测所有亚型的禽流感病毒。 NP蛋白并非完全保守，因此要保证所制备的单抗是针对其保守性抗原位点的。 ; 3.2 关于抗NP蛋白单抗; 本实验所制备的2株高效价的抗NP蛋白的单抗用鸡新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征病毒、传染性喉气管炎病毒检测，均无交叉反应，具有很好的特异性。 ; 本研究所获得的针对禽流感病毒NP蛋白的单克隆抗体为禽流感的诊断，甚至是A型流感病毒的诊断提供了高质量的试剂。 本实验室已在此基础上进行了双夹心ELISA方法检测不同亚型的禽流感病毒的研究，并已经研制出了相关试剂盒应用于临床检测，为实现实验室诊断的标准化、开展流行病学调查研究奠定了很好的基础 。 ;3.3 关于抗H3N8 HA蛋白单抗; HA是流感病毒的主要表面抗原，一般情况下，新分离的毒株鉴定，一般要做HA的亚型鉴定，故研究针对HA的Mabs，并以其建立快速的检测方法，具有十分重要的意义。 本研究中制备的3株抗H3亚型的Mabs，为抗原分型、血清学诊断、疫苗质量监控及流行病学调查奠定了基础。;敬请指导