重组大肠杆菌利用乳糖自诱导系统融合表达天蚕素AD和蛙BuforinⅡ.pdfVIP

第 ??卷 第 ?期 ????年 ?月? 科 学 技 术 与 工 程? ???．??? ??．?? ???．????? ????— ????????????—????—?? ?????????????????????????????????? ⑥ ????? ???．????．?????．? 重组大肠杆菌利 用乳糖 自诱导 系统融合? 表达天蚕素 ??和蛙 ??????????? 陈? 泉 扈进冬 李? 哲? 郭? 凯? 李纪顺? 杨合 同? ?山东省科学院中 日友好 生物技 术研究 中心 ，山东省应用微生物重点实验室 ，济南 ???????? 摘 要? 以包含 质粒 ???—???—???—?????????的大肠杆菌 ?????????为研究对 象，开发 了一种利用 乳糖 自诱 导方 式表达天蚕? 素 ??和蛙 ?????????的表达系统。首先 ，在 ??培 养基 中研 究 了乳糖 浓度 、诱 导时机和诱 导 时间对 目的蛋 白表 达 的影 响。然? 后 ，利用“分解代谢 物阻遏 ”原理构建乳糖 自诱 导表达 系统，以“葡萄糖 ?主碳源”两种碳源的依次代谢将蛋 白表达过程分 为两? 个 阶段 ：第一 阶段为菌体 生长 阶段 ，菌体利用葡萄糖 生长，乳 糖无 法进入细胞 诱 导蛋 白表达 ；第二 阶段为蛋 白表达 阶段 ，葡 萄? 糖耗尽 ，菌体开始利用主碳源生长 ；同时乳糖进入细胞诱导蛋 白表达。最后 ，利用优 选 的“葡 萄糖 ?木 糖”组合 自诱 导表达 天? 蚕 素 ??和 ??????????的 融合蛋 白，得到的 目的蛋 白占全菌 总蛋 白含量 的??．?％。? 关键词 大肠杆 菌? 乳糖? 自诱导? 天蚕 素 ??? ?????????? 融合表达? 中图法分类号 ????．?；? 文献标志码 ?? 抗菌肽是生物体受到外界病原微生物入侵时产? 产 ，成 为大 量 生产 抗 菌 肽 的首选 途 径 。在 大 肠 杆 菌? 生 的具有 抗 菌活性 的 阳离 子 多 肽 ，是 生 物 先 天免 疫? 表达系统 中，人们常常用 ?????异丙基一?—?一巯基半? 重要 的组成部分¨?。抗 菌肽对细 菌有很强 的杀 伤? 乳糖苷 ?作为表达诱导剂 。然而 ，????不仅价格 昂? 作用 ，尤其是其对某些耐药性病原菌 的杀灭作用 更? 贵 ，而且 具有 潜 在毒 性 ，不 利 于应 用 于大 规模 生? 引起 了人们 的重视 ，并且抗菌肽还具有分子量低 、水? 产??。乳糖 因其无毒 、廉 价等优点 可作 为 ???? 的? 溶性好 、热稳定 、抗菌谱广 、不易产生耐药性等特点 ，? 替代品用于诱 导蛋 白表达 。与 ????不 同的是 ，乳? 显示 出 了在 医药 、食 品、农 业 等领 域 良好 的应 用? 糖必须借助于乳糖通透酶 的作用进入细胞 ，并转化? 前 景? 。? 为别乳糖才能发挥诱导作用 。而且 ，乳糖会作为碳?