第三章-生物制品的制备选编.ppt

第三章 生物制品的制备 （Preparation） 第一节 一般生物制品的制备方法 (Preparation of general bio-preparate ) 一、生物制品原料的选择、预处理与保存方法 （Selection、pretreatment and preservation of raw material of biopreparate） ;（1）原料选择 原料的选择原则： ①有效成分含量高，新鲜； ②原料来源丰富，产地较近； ③原料中杂质含量少； ④原料成本低等。;原料的选择注意事项： ①植物原料生长的季节性； ②微生物原料的对数期； ③动物原料的年龄与性别。;（2）原料的预处理与保存： ①动物原料：采集后要立即处理，去除结缔组织、脂肪组织等，并迅速冷冻贮存。 ②植物原料：要择时采集并就地去除不用的部分，保鲜处理； ③微生物原料：要及时将菌细胞与培养液分开，进行保鲜处理。 ;原料的保存方法主要有： ①冷冻法。该方法适用于所有生物原料。常用-40℃速冻。 ②有机溶剂脱水法。常用的有机溶剂是丙酮。该法适用于原料少而价值高、有机溶剂对活性物质没有破坏作用的原料，如脑垂体等。 ③防腐剂保鲜。常用乙醇、苯酚等。该法适用于液体原料，如发酵液、提取液等。 ;二、生物制品的提取（extraction） (1)生物组织与细胞的破碎（obtrude of tissue and cell）：生物制品大部分存在于生物组织或细胞中，要提高提取率，破碎过程是非常重要的。常用的破碎方法： ①磨切法，该法属于机械破碎方法，设备有组织捣碎机、胶体磨、匀浆器、匀质机、球磨机、乳钵等。 ②压力法，有加压与减压两种，常用的法兰西压釜使用效果良好。 ;③反复冻融法，设备简便，活性保持好，但用时较长。 ④超声波振荡破碎法，该方法破碎效果较好，但由于局部发热，对活性有损失。 ⑤自溶法或酶解法，用得较少。;（2）提取（extraction） 生物组织与细胞破碎后要立即进行提取。提取时，首先要根据活性物质的性质， ①选择提取试剂。提取试剂主要有：水、缓冲溶液、盐溶液、乙醇、其他有机溶剂（如氯仿、丙酮等）。 ②考虑提取溶剂的用量及提取次数、提取时间。 ③注意提取的温度、pH、变性剂等因素。 ;三、分离纯化的基本过程;四、分离纯化的基本技术 (1)分离纯化技术应满足的要求 ① 技术条件要温和，能保持目的产物的生物活性；② 选择性要好，能从复杂的混合物中有效地将目的产物分离出来，达到较高纯化倍数；③ 收率要高；④ 两个技术之间要能直接衔接，不需要对物料加以处理或调整；⑤ 分离纯化过程要快，能够满足高生产率的需求。 ;2.细胞破碎与固液分离 （ 1 ）细胞收集 常用离心分离的方法；膜过滤法也逐渐得到广泛应用。 （ 2 ）细胞破碎 有机械破碎法和非机械破碎法。 （ 3 ）固液分离 分离细胞碎片是比较困难的，可以用离心、膜过滤或双水相分配的方法，使细胞碎片分配在一相（通常为下相）而分离，同时也起部分纯化作用。 ;3.目的产物的分离纯化 分离纯化主要依赖色谱分离方法。色谱技术是下游精制阶段的常用手段，该法优点是具有多种多样的分离机制，设备简单，便于自动化控制和分离过程中无发热等有害效应。色谱技术分为离子交换色谱、疏水色谱、反相色谱、亲和色谱、凝胶过滤色谱、高压液相色谱等。 ;第二节 各类生物制品的分离纯化方法;一、蛋白质类制品的分离纯化方法（Isolation and depuration of protein production） 包括蛋白质、多肽和酶类等药物。分离纯化方法有： (1)沉淀法（precipitation）：蛋白质、酶的初步纯化往往用沉淀法。原理是使蛋白质胶体颗粒破坏，从而沉淀蛋白质。常用的有盐析法（salting out）、有机溶剂沉淀法（organic solvent precipitation）、等电点沉淀法（isoelectric precipitation）、与靶物质结合沉淀法（如抗体—抗原）（target banding precipitation）等。 ;(2) 按分子大小分离的方法：有超滤法（ultrafiltration）和透折法（dialysis）（即膜分离方法）、凝胶层析法（gel chromatography）、超速离心法（ultra centrifugation）等。其中膜分离法可用于生物大分子