枯草芽孢杆菌葡萄糖酸操纵子突变株的构建.pdfVIP

一 ??一? 江苏农业科学 ????年第 ??卷第 ?期? 张西锋 ，王丽梅 ，李万芬．枯草芽孢杆菌葡萄糖酸操纵 子突变株 的构建???．江苏农业科 学，????，?????：??— ??? 枯 草芽孢杆菌葡萄糖 酸操纵子突变株 的构建? 张西锋?，王丽梅?，李万芬? ??．武汉工业学 院生物与制药工程学院，湖北武汉 ??????；?．武汉星辰现代 生物工程有限公司 ，湖北武汉 ???????? 摘要 ：葡萄糖激酶为核黄素的生物合成原料 ???和 ?一磷酸核酮糖合成 的关键酶 ，为 了提高 葡萄糖激酶 的表达 ，? 构建 了整合表 达载体 ????一??，通过 同源重组 的方法将线性 化 的 ????一??转化枯 草芽孢杆 菌 ????，得到 ????，在? 葡萄糖酸操纵子基因 ????和 ????基因之间引入 了强启动子 ????，为进一步提高核黄素的产量提供原料保 障。? 关键词 ：同源重组 ；枯草芽孢杆菌 ；葡萄糖酸操纵 子? 中图分类号 ：????? 文献标志码 ：?? 文章编号 ：??? — ??? ????????— ????— ??? 在枯草芽孢杆 菌 中，磷 酸烯醇式丙酮 酸 ?????一糖磷酸? ????插 入枯 草 芽孢 杆 菌 ????的葡 萄 糖酸 操 纵 子 ??? 和? 转移酶系统?????是其主要的糖 运输系统 。葡萄糖主要通过? ????基因之间。? ????系统进入细胞而被细胞 吸收，参 与糖 的中心代谢途径 ：糖? ? 材 料 和 方 法? 酵解途径 ?????、磷酸戊糖途径 ?????、???循环、溢流代谢? 途径和呼吸链? 。???途 径可分 为氧化磷 酸戊糖途径 和非? ?．? 质 粒 与 菌株 ? 氧化磷酸戊糖 途径 ，在 氧化磷 酸戊 糖途 径 中，葡 萄糖 经 ????? 大 肠 杆 菌 质 粒 ??????? 和 枯 草 杆 菌 的 整 合 载 体? 系统进入细胞后 ，水解为 ?一磷酸葡萄糖 ??一?一??，?一?一? ????????? ?具有壮观霉素抗性标记 ??????为本实验室保存 ；? ?再脱氢生成 ?一磷酸葡糖酸内酯 ，然后水解生成 ?一磷 酸葡? 枯草芽 孢 杆 菌 ?．?????????????、?．?????????????”???一???，? 糖酸 ，再氧化脱羧生成 ?一磷酸核酮糖? ；在非氧化磷酸戊糖? ???，?????，????，????和地衣 芽胞杆 菌 ?，??????????为本 实? 途径 中，?．?磷 酸核酮糖经过一系列转酮基及转醛基反应发生? 验室保存 。? 重排 ，可以生成 四碳糖、六碳糖及七碳糖 。? ?．? 工 具 酶 与 试 剂 盒? ???途径主要提供 ????